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wq4125

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】以cDNA为模板PCR扩增目的片段时条带较浅原因 已有3人参与

已经扩增出目的片段,是不是模板量有问题,50ul体系模板量大概为2.5ug
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)

wq4125(金币+1): 2010-03-14 00:54
用cDNA聚合酶走的比较慢 建议延长延伸时间
4楼2010-03-13 00:14:36
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

wq4125(金币+2):谢谢,上胶图了,准备再试试 2010-03-13 00:07
能上个图看看吗?
有可能跟模板量有关系,稍微多加一点试试,另外引物多加一点,带就亮了,但是可能会有非特异性扩增,退火温度适当降低也会有效

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-3-12 at 16:53 ]
2楼2010-03-12 16:49:32
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wq4125

铜虫 (小有名气)

上胶图
前4个为一个产物大概800bp,后4个为一个产物,大概400bp
3楼2010-03-13 00:05:25
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spiderboy

金虫 (正式写手)

wq4125(金币+1): 2010-03-13 12:48
模板浓度低,目的序列拷贝数低,可以把片段回收后,再扩
5楼2010-03-13 10:19:30
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