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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】以cDNA为模板PCR扩增目的片段时条带较浅原因
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wq4125

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】以cDNA为模板PCR扩增目的片段时条带较浅原因 已有3人参与

已经扩增出目的片段，是不是模板量有问题，50ul体系模板量大概为2.5ug
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1楼 2010-03-12 16:26:48
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
wq4125(金币+1): 2010-03-13 12:48
同意楼上，模板浓度低
另外有引物带，说明引物的浓度足够了
降低一下退火温度试试
胶的质量好像也一般，marker看起来一般，稍微有点模糊
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6楼2010-03-13 10:50:18
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
wq4125(金币+2):谢谢，上胶图了，准备再试试 2010-03-13 00:07
能上个图看看吗？
有可能跟模板量有关系，稍微多加一点试试，另外引物多加一点，带就亮了，但是可能会有非特异性扩增，退火温度适当降低也会有效

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-3-12 at 16:53 ]
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2楼2010-03-12 16:49:32
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wq4125

铜虫 (小有名气)
上胶图
前4个为一个产物大概800bp，后4个为一个产物，大概400bp
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3楼2010-03-13 00:05:25
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)
wq4125(金币+1): 2010-03-14 00:54
用cDNA聚合酶走的比较慢 建议延长延伸时间
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4楼2010-03-13 00:14:36
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