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dart512

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xy19860508(金币+10): 2012-02-25 12:25:26
wanhscn(金币+5, MolEPI+1): 很好!欢迎继续解答,必要时将授予专家指数! 2012-02-25 15:56:57
xy19860508: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-05-04 12:10:31
1.从图A中看,虽然你做了退火温度的优化,但是可以看见很明显的非特异条带,说明你的引物的特异性并不是太好。。而且我不明白你设计300bp的目的片段作为鉴定的依据,我觉得可以把目的片段的大小设计的大点。
2.及时是之前鉴定的阳性的,再下一次PCR中也有可能出不来,具体原因很多,就把它作为系统误差吧,没必要较真,只要再做两次实验,能出符合自己的结果就行了。
3.高保真的扩增效率是不及普通Taq酶的,所以酶量可以提高点。
我的建议:
1看你做的是AIV的哪个型,仔细考虑你的引物的特异性;。
2可以用HOFFMAN的通用引物试试,再不行重新设计引物测出你所需要的序列的全长;
3在获得一般序列的基础上再调整引物用高保真酶扩增获得真实的全长。
祝你好运。
2楼2012-02-25 12:15:42
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