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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RT-PCR 试验中扩增片段大小？
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swallow52u

银虫 (正式写手)

[求助] RT-PCR 试验中扩增片段大小？

我做的是大鼠骨骼肌GLUT4这个基因mRNA的表达，我参考了两篇文献这个基因的引物，我想知道PCR扩增出来的片段是不是应该一样大小！ 还有就是我参考的文献上的引物，但文献中没有写扩增的片段是多大，我怎样确定我PCR产物的片段大小！
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我要我的幸福,谁也夺不走!
1楼2011-05-15 02:34:44
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andy99990000

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-05-15 09:46:06
swallow52u(金币+1): 谢谢你啊 ！我就是不能确定我做的结果对不对，我电泳的结果很好！片段长度是150，但和参考文献不一样啊！ 2011-05-16 01:13:31
swallow52u(金币+1): 2011-05-22 10:41:20
如果只是想粗略估计片段大小，直接跑胶对比marker条带就能知道大致长度。

如果要具体到确定是不是目的条带，就做基因克隆，再拿去测序。通过与Genbank序列比对就能知道你要的答案了。希望能有帮助吧~
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2楼2011-05-15 03:48:07
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-05-15 09:46:24
swallow52u(金币+1): 谢谢啊 ！我这就下载啊！ 2011-05-16 01:14:02
下载个primer5 的软件
将原始序列拷进去，再输入引物序列，自动寻找匹配，然后就能看到扩增片段究竟多长了
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3楼2011-05-15 06:45:00
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

swallow52u(金币+1): 谢谢学习了啊！ 2011-05-16 01:14:33
补充一下，pcr产物不是一定要一般大的，根据你的引物在序列的位置不同，它们之间的距离不同，扩增出的大小也不同
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4楼2011-05-15 06:46:28
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-05-15 09:46:38
swallow52u(金币+1): 谢谢指导啊 ！ 2011-05-16 01:15:06
你既然知道自己的目的基因，可以通过电子PCR得到你要的大小。其实就是在其他该基因的序列上，找到你的引物位置，可以借助软件（如Primer5、DNAman等）完成，这样知道大概的大小。然后根据跑电泳，对Marker知道具体大小，然后回收测序，比对序列，确定是不是你要的基因，同时也知道了你的基因准确大小。
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戒骄戒躁，坦荡做人，平常心做事，享受生活之美！！
5楼2011-05-15 08:46:17
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