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王有朝

新虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】rt-PCR作出的扩增曲线刚开始为什么会有一条基线?

rt-PCR作出的扩增曲线为什么刚开始会有一条基线,随后才会产生荧光?荧光不是从开始扩增的时候就应该有吗?
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littlehong

木虫 (初入文坛)



amisking(金币+1):鼓励交流! 2010-11-26 20:12:39
楼主所说的realtime pcr检测把
因为扩增曲线是用仪器检测出来了。在实验过程中,只有荧光值超过了仪器的检测最低的阈值才能检测出来的
2楼2010-11-26 12:26:21
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j2

木虫 (正式写手)


理论上是一直在增加,可实际是荧光信号值低了,仪器测不出来。直到高于灵敏度了才有值的增加
3楼2010-11-26 12:38:29
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★ ★
lstt09nk(金币+2):鼓励交流 2010-11-26 20:01:39
王有朝(金币+3):非常感谢回答,但是我还是不明白,背景荧光是怎么产生得? 2010-11-27 16:14:51
不是机器测不出来,而是刚开始的时候产物比较少,荧光值比较低,相对于背景荧光来说不能构建指数增殖曲线

所以就需要扩增产物的荧光值大大的超过背景荧光时,数据才真正反应扩增情况

这就是设置基线和阈值的原因
4楼2010-11-26 17:13:45
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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
荧光背景属于基础问题了

染料法:荧光染料插入双链之前就是发光的,只不过很低而已,这就是背景

探针法:淬灭基团是无法完全将发光基团完全屏蔽掉的,这就是背景

另外,realtime 不缩写为RT,如果非要简称的话,简称Q pcr
5楼2010-11-27 19:26:24
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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1, 2, 4, 8, 16, 32……65536, 131072, 262144……67108864, 134217728……

这样的数你去做个x-循环数 y-荧光值看看
6楼2010-11-27 22:02:15
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