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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】rt-PCR作出的扩增曲线刚开始为什么会有一条基线？
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王有朝

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】rt-PCR作出的扩增曲线刚开始为什么会有一条基线？

rt-PCR作出的扩增曲线为什么刚开始会有一条基线，随后才会产生荧光？荧光不是从开始扩增的时候就应该有吗？
    非常感谢回答……
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1楼 2010-11-26 10:25:32
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j2

木虫 (正式写手)
理论上是一直在增加，可实际是荧光信号值低了，仪器测不出来。直到高于灵敏度了才有值的增加
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3楼2010-11-26 12:38:29
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littlehong

木虫 (初入文坛)
★
amisking(金币+1):鼓励交流！ 2010-11-26 20:12:39
楼主所说的realtime pcr检测把
因为扩增曲线是用仪器检测出来了。在实验过程中，只有荧光值超过了仪器的检测最低的阈值才能检测出来的
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2楼2010-11-26 12:26:21
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)
★ ★
lstt09nk(金币+2):鼓励交流 2010-11-26 20:01:39
王有朝(金币+3):非常感谢回答，但是我还是不明白，背景荧光是怎么产生得？ 2010-11-27 16:14:51
不是机器测不出来，而是刚开始的时候产物比较少，荧光值比较低，相对于背景荧光来说不能构建指数增殖曲线

所以就需要扩增产物的荧光值大大的超过背景荧光时，数据才真正反应扩增情况

这就是设置基线和阈值的原因
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4楼2010-11-26 17:13:45
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
荧光背景属于基础问题了

染料法：荧光染料插入双链之前就是发光的，只不过很低而已，这就是背景

探针法：淬灭基团是无法完全将发光基团完全屏蔽掉的，这就是背景

另外，realtime 不缩写为RT，如果非要简称的话，简称Q pcr
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5楼2010-11-27 19:26:24
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