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yesali

木虫 (正式写手)

[求助] Real-time PCR溶解曲线Tm值，是不是在不同的仪器上做出来的不一样？

最近在做qPCR，引物是按照国外文献提供的序列合成的，实验发现扩增产物的溶解曲线是单一的峰，但是Tm分国外文献不一样，有的相差接近5摄氏度（文献表明53.35，而我自己做的是81.69）。
请问各位，Tm值会不会受不同仪器、不同试剂的影响？变化幅度在什么范围内能够接受，谢谢！
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1楼 2013-06-22 15:14:54
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yesali(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-23 12:36:15
53.35不可能是熔解曲线的tm吧，我觉得应该指的是引物的退火温度。一般qPCR产物的tm是八十多度的。
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2楼2013-06-23 01:37:09
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
yesali(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-23 12:36:23
yesali: 金币+1 2013-06-24 20:18:04
Tm是和产物直接相关的，应该不会与仪器相关，但可能与不同qPCR的盒子有一点点关系，即使不同也是非常小的差别。
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3楼2013-06-23 01:39:19
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yesali

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-23 01:37:09
53.35不可能是熔解曲线的tm吧，我觉得应该指的是引物的退火温度。一般qPCR产物的tm是八十多度的。

不好意思，弄错了，是83.35
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4楼2013-06-24 20:16:50
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by yesali at 2013-06-24 20:16:50
不好意思，弄错了，是83.35...

用的是同一种荧光染料吗？
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5楼2013-06-24 23:04:35
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taccycle

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-23 01:39:19
Tm是和产物直接相关的，应该不会与仪器相关，但可能与不同qPCR的盒子有一点点关系，即使不同也是非常小的差别。

楼上正解，Tm值受离子浓度的影响非常大，不同的qPCR盒子其成分可能不一样，就有可能造成熔解温度不同，这个原理你可以看看相关网页资料去，所以熔解曲线不是因为机器不同而不同，是因为qPCR的盒子不同而不同
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用心
6楼2013-10-17 12:30:37
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