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Renjingyu

金虫 (小有名气)

[求助] real-timePCR的定量问题 已有4人参与

接下来要做荧光定量PCR,但是我们没有测核酸浓度的仪器,只有一个紫外分光光度计,能做吗?
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匿名

用户注销 (小有名气)

★
感谢参与,应助指数 +1
Renjingyu(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励热心回帖交流 2014-11-16 22:21:56
本帖仅楼主可见
2楼2014-11-16 20:19:12
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Renjingyu: 金币+2 2014-11-17 10:24:13
理论上,紫外分光光度计也是可以测定核算浓度的,但需要的RNA的量就比Nonodrop多了,精度上也不是很准。楼主RNA很多的话,可以试试。
另外,做qRT-PCR,RNA的质量很重要,一定要跑电泳看看。
医学&统计学
3楼2014-11-16 22:35:11
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qzddht

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
Renjingyu(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-18 18:16:38
紫外分光光度计也是可以的,稀释一下就可以了,跑胶比较上样的Marker的亮度,可以大致知道浓度。。
做最好的自己
4楼2014-11-17 14:54:18
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Renjingyu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by qzddht at 2014-11-17 14:54:18
紫外分光光度计也是可以的,稀释一下就可以了,跑胶比较上样的Marker的亮度,可以大致知道浓度。。

紫外分光光度计需要把RNA稀释太多倍,而且RNA也容易降解,怀疑结果是否可信。
即将加入研究生的大军,迷茫!
5楼2014-11-17 16:32:51
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Renjingyu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gegelove020 at 2014-11-16 20:19:12
不测浓度,怎么确定每个样品加多少微升呢?反应体系加入的cDNA量是一定的,你看看试剂盒上的说明书里面的反应体系。

现在是实验条件有限,不能准确定量,所以来这里请教各位有没有只用分光光度计来做的。
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6楼2014-11-17 16:34:40
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guoliwang

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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Renjingyu: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-11-18 14:05:47
我一直用分光光度计测,79ulDEPC水直接加到RNA专用比色杯里,浓度为Abs260*40*80ng/ul。挺准的啊。用eppendorf的2ul量程枪,枪头无RNA酶。注意枪头外侧不要沾上液体,里面不要有气泡。
慎思明辨博学笃行
7楼2014-11-17 21:09:34
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匿名

用户注销 (小有名气)

本帖仅楼主可见
8楼2014-11-18 09:12:41
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Renjingyu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by gegelove020 at 2014-11-18 09:12:41
那你就计算浓度吧,你查一下,我记得之前查过计算方法...

9楼2014-11-18 14:06:09
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