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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » real-timePCR的定量问题
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Renjingyu

金虫 (小有名气)

[求助] real-timePCR的定量问题 已有4人参与

接下来要做荧光定量PCR,但是我们没有测核酸浓度的仪器，只有一个紫外分光光度计，能做吗？
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即将加入研究生的大军，迷茫！
1楼 2014-11-16 18:30:33
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匿名

用户注销 (小有名气)
★
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Renjingyu(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励热心回帖交流 2014-11-16 22:21:56
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2楼2014-11-16 20:19:12
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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Renjingyu: 金币+2 2014-11-17 10:24:13
理论上，紫外分光光度计也是可以测定核算浓度的，但需要的RNA的量就比Nonodrop多了，精度上也不是很准。楼主RNA很多的话，可以试试。
另外，做qRT-PCR，RNA的质量很重要，一定要跑电泳看看。
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医学&统计学
3楼2014-11-16 22:35:11
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qzddht

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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Renjingyu(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-18 18:16:38
紫外分光光度计也是可以的，稀释一下就可以了，跑胶比较上样的Marker的亮度，可以大致知道浓度。。
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做最好的自己
4楼2014-11-17 14:54:18
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Renjingyu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by qzddht at 2014-11-17 14:54:18
紫外分光光度计也是可以的，稀释一下就可以了，跑胶比较上样的Marker的亮度，可以大致知道浓度。。

紫外分光光度计需要把RNA稀释太多倍，而且RNA也容易降解，怀疑结果是否可信。
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即将加入研究生的大军，迷茫！
5楼2014-11-17 16:32:51
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Renjingyu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gegelove020 at 2014-11-16 20:19:12
不测浓度，怎么确定每个样品加多少微升呢？反应体系加入的cDNA量是一定的，你看看试剂盒上的说明书里面的反应体系。

现在是实验条件有限，不能准确定量，所以来这里请教各位有没有只用分光光度计来做的。
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即将加入研究生的大军，迷茫！
6楼2014-11-17 16:34:40
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guoliwang

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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Renjingyu: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-11-18 14:05:47
我一直用分光光度计测，79ulDEPC水直接加到RNA专用比色杯里，浓度为Abs260*40*80ng/ul。挺准的啊。用eppendorf的2ul量程枪，枪头无RNA酶。注意枪头外侧不要沾上液体，里面不要有气泡。
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慎思明辨博学笃行
7楼2014-11-17 21:09:34
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匿名

用户注销 (小有名气)
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8楼2014-11-18 09:12:41
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Renjingyu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by gegelove020 at 2014-11-18 09:12:41
那你就计算浓度吧，你查一下，我记得之前查过计算方法...

9楼2014-11-18 14:06:09
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