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yanhuazh2008

金虫 (小有名气)

[求助] real time PCR 溶解曲线 目的产物后又出一个峰 怎么回事

real time PCR 溶解曲线 目的产物后又出一个峰 之前做了几次都没出现过 到底是社么
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1楼2012-06-28 20:27:52
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回帖置顶 ( 共有1个 )

peng~yu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 很热心的回复，热心的虫虫 2012-07-06 13:42:06
yanhuazh2008: 金币+8, ★★★很有帮助 2012-07-09 09:54:57
出现了其他的峰造成的原因肯定是产物不纯，但是我想分几个方面还做分析：
1.环境污染或者说人为操作的污染，这方面的因素我想可以第一个来排除，因为你之前做的样品没有其他的峰，要是前后都是在一个地方做实验的话应该不会出现环境污染，另外因为两次结果的都有杂峰出现，所以人为因素也不是很有可能。
2.引物的污染或者样品的污染。我觉得这两者的污染的可能性是很大的，但是换一种思路来想的话，要单单是样品污染的话应该不会只扩出来一个杂峰，所以我想可能是因为引物的污染
3.退火温度稍低而导致的非特异性扩增。这一点的话因为你之前扩的没有问题，这一点可能不会产生影响，但是也不能排除仪器的前后误差。
希望我的解释可以帮助到你~
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5楼2012-07-05 21:21:27
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普通回帖

yuzhiming

捐助贵宾 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
要么引物不特异，要么就是样品有污染。
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2楼2012-06-28 22:09:17
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longrna

新虫 (正式写手)
同意楼上。扩增产物有杂带。
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伟大航线....
3楼2012-06-29 09:13:27
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16752618

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是样品有分解现象，可以根据其目标峰的峰面积及峰高判断下
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everythingwillbeOK
4楼2012-06-30 16:51:32
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yanhuazh2008

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by peng~yu at 2012-07-05 21:21:27
出现了其他的峰造成的原因肯定是产物不纯，但是我想分几个方面还做分析：
1.环境污染或者说人为操作的污染，这方面的因素我想可以第一个来排除，因为你之前做的样品没有其他的峰，要是前后都是在一个地方做实验的话 ...

太感谢了 我后来也觉得最可能的就是引物污染的问题 我再试一试
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6楼2012-07-06 09:45:43
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