应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助 real-time PCR 曲线弯折 问题
81/1返回列表
查看: 1755  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

pku_xiaoxj

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助 real-time PCR 曲线弯折 问题

PCR扩增曲线如图所示，50uL体系，人类基因组DNA 50ng ， 引物25 pmol 。扩增曲线上升一段后出现拐点，求指导~谢谢~

fh.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-09-25 17:59:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-09-26 14:26:30
嗯..........................
       没见过这样的曲线，只见过S型扩增，一般会认为是体系与引物问题，这说的就太泛了。
       但是个人觉得你50uL体系太大了吧，我记得某些厂家推荐的都没有这么高（要知道厂家都是推荐偏大体系的），本实验室一般10uL足矣，最高只试过20uL。不明白你50uL有什么特殊用途.........
       个人感觉需要优化你的体系
赞一下 回复此楼
Let God do with it as He wills
2楼2012-09-25 23:50:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

junminh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人感觉仪器问题可能性较大
赞一下 回复此楼
3楼2012-09-26 08:07:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

475502411

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-26 14:26:41
引用回帖:
3楼: Originally posted by junminh at 2012-09-26 08:07:48
个人感觉仪器问题可能性较大

我感觉是做的问题，优化一下反应条件吧
反应体系没有特殊要求就不要做那么多了
20足够了
赞一下 回复此楼
可以朝九晚五，也能浪迹天涯
4楼2012-09-26 08:50:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

子衿物语

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个一般是25ul体系，这个曲线应该表明你的引物不行，浓度太低了
赞一下 回复此楼
5楼2012-09-28 09:42:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

桃李之乐

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

我最近在做的qpcr也出现和楼主一样的问题，准备尝试提高模板浓度与提高循环数试试
赞一下 回复此楼
反观自省
6楼2012-10-23 13:55:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 鼓励应助，分子生物版块，期待你的精彩。 2013-04-01 22:39:57
这个问题，我觉得很泛，我遇到过这样的问题，甚至比你这个曲线更夸张，个人感觉有以下几个可能：

1）引物探针问题：包括引物探针设计不理想、有
2）体系问题：我指的体系大部分应该是你所用的reaction buffer，换换buffer，或许有改观
赞一下 回复此楼
7楼2012-10-23 15:50:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pillow2012

新虫 (初入文坛)
real time pcr为什么会饱和达到一个峰值？就是s型曲线的平台是怎么回事？
赞一下 回复此楼
8楼2013-04-01 21:06:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 pku_xiaoxj 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k37jurhrau 2026-05-16 3/150 2026-05-16 13:57 by vcdazktkjx
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 xx7gd5zq4e 2026-05-15 5/250 2026-05-16 12:24 by h3oerqvkv9
[硕博家园] 考博自荐 +3 科研狗111 2026-05-13 4/200 2026-05-16 11:45 by 科研狗111
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 l7k6xnh0yc 2026-05-14 4/200 2026-05-16 11:36 by h3oerqvkv9
[硕博家园] 申请博士 +3 呃?呃 2026-05-15 3/150 2026-05-16 11:01 by a4742549
[文学芳草园] 裁员滚滚，退居二线 +4 J_wei 2026-05-10 4/200 2026-05-16 10:52 by zh10246
[基金申请] 这年头没有找到涵评专家，还有中面上的可能吗 +11 dd921ww 2026-05-12 13/650 2026-05-16 09:16 by Howard28
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 l7k6xnh0yc 2026-05-14 4/200 2026-05-16 04:44 by k37jurhrau
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 l7k6xnh0yc 2026-05-14 3/150 2026-05-16 01:49 by k37jurhrau
[文学芳草园] 窗边初夏的小雨 +8 阿美_Lml888 2026-05-09 11/550 2026-05-15 23:54 by WASM
[论文投稿] 有带发论文的吗 +4 山楂之术 2026-05-09 4/200 2026-05-15 15:40 by 妹子不好惹
[文学芳草园] 风把牡丹吹跑了 +5 myrtle 2026-05-12 9/450 2026-05-15 15:27 by myrtle
[基金申请] 精华III:  评审感受-评审感受-评审感受 +14 ferrarichen 2026-05-11 18/900 2026-05-15 11:12 by cmhchen
[教师之家] 教学课件你会给同学吗 +8 硕士研究生吗 2026-05-13 8/400 2026-05-14 22:23 by 常规沥青
[考博] 26应届毕业生考博求助 +3 wo一定上岸 2026-05-13 3/150 2026-05-14 21:47 by 明海天涯
[基金申请] 重磅！青年科学基金项目（C类）资助增幅预计超过50% +5 水和泥不是水泥 2026-05-13 7/350 2026-05-14 20:57 by 水和泥不是水泥
[高分子] 本人最近太闲了，谁有问题可以提，每天会统一回复 +8 一切都是空工 2026-05-12 19/950 2026-05-14 20:03 by 一切都是空工
[考博] 材料类只有一篇综述能申博么 +4 乐逍遥谷 2026-05-13 4/200 2026-05-14 12:05 by zhyzzh
[基金申请] 请问大佬b0816评完了吗 +3 市民华南虎 2026-05-12 7/350 2026-05-14 07:41 by 市民华南虎
[考博] 现在不知道怎么办，感觉很痛苦 +4 qweww 2026-05-11 5/250 2026-05-11 20:23 by Oversize
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭