应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助 real-time PCR 曲线弯折 问题
81/1返回列表
查看: 1969  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

pku_xiaoxj

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助 real-time PCR 曲线弯折 问题

PCR扩增曲线如图所示，50uL体系，人类基因组DNA 50ng ， 引物25 pmol 。扩增曲线上升一段后出现拐点，求指导~谢谢~

fh.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-09-25 17:59:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-09-26 14:26:30
嗯..........................
       没见过这样的曲线，只见过S型扩增，一般会认为是体系与引物问题，这说的就太泛了。
       但是个人觉得你50uL体系太大了吧，我记得某些厂家推荐的都没有这么高（要知道厂家都是推荐偏大体系的），本实验室一般10uL足矣，最高只试过20uL。不明白你50uL有什么特殊用途.........
       个人感觉需要优化你的体系
赞一下 回复此楼
Let God do with it as He wills
2楼2012-09-25 23:50:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

junminh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人感觉仪器问题可能性较大
赞一下 回复此楼
3楼2012-09-26 08:07:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

475502411

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-26 14:26:41
引用回帖:
3楼: Originally posted by junminh at 2012-09-26 08:07:48
个人感觉仪器问题可能性较大

我感觉是做的问题，优化一下反应条件吧
反应体系没有特殊要求就不要做那么多了
20足够了
赞一下 回复此楼
可以朝九晚五，也能浪迹天涯
4楼2012-09-26 08:50:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

子衿物语

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个一般是25ul体系，这个曲线应该表明你的引物不行，浓度太低了
赞一下 回复此楼
5楼2012-09-28 09:42:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

桃李之乐

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

我最近在做的qpcr也出现和楼主一样的问题，准备尝试提高模板浓度与提高循环数试试
赞一下 回复此楼
反观自省
6楼2012-10-23 13:55:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 鼓励应助，分子生物版块，期待你的精彩。 2013-04-01 22:39:57
这个问题，我觉得很泛，我遇到过这样的问题，甚至比你这个曲线更夸张，个人感觉有以下几个可能：

1）引物探针问题：包括引物探针设计不理想、有
2）体系问题：我指的体系大部分应该是你所用的reaction buffer，换换buffer，或许有改观
赞一下 回复此楼
7楼2012-10-23 15:50:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pillow2012

新虫 (初入文坛)
real time pcr为什么会饱和达到一个峰值？就是s型曲线的平台是怎么回事？
赞一下 回复此楼
8楼2013-04-01 21:06:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 pku_xiaoxj 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 2rKfVQg2jQww 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:34 by Xc2FxHsHkBNc
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 2rKfVQg2jQww 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:23 by Xc2FxHsHkBNc
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 4/200 2026-11-07 16:50 by Xc2FxHsHkBNc
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 4/200 2026-11-07 16:28 by Xc2FxHsHkBNc
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 5/250 2026-11-07 16:17 by Xc2FxHsHkBNc
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 5/250 2026-11-07 16:06 by Xc2FxHsHkBNc
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 6/300 2026-11-07 15:44 by Xc2FxHsHkBNc
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 14/700 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 17/850 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:11 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
[基金申请] 各位基础老师们，看完中央《从严治党》的决定后，对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭