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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助 real-time PCR 曲线弯折 问题
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pku_xiaoxj

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助 real-time PCR 曲线弯折 问题

PCR扩增曲线如图所示，50uL体系，人类基因组DNA 50ng ， 引物25 pmol 。扩增曲线上升一段后出现拐点，求指导~谢谢~

fh.png
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1楼 2012-09-25 17:59:35
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-09-26 14:26:30
嗯..........................
       没见过这样的曲线，只见过S型扩增，一般会认为是体系与引物问题，这说的就太泛了。
       但是个人觉得你50uL体系太大了吧，我记得某些厂家推荐的都没有这么高（要知道厂家都是推荐偏大体系的），本实验室一般10uL足矣，最高只试过20uL。不明白你50uL有什么特殊用途.........
       个人感觉需要优化你的体系
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Let God do with it as He wills
2楼2012-09-25 23:50:36
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junminh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人感觉仪器问题可能性较大
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3楼2012-09-26 08:07:48
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475502411

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-26 14:26:41
引用回帖:
3楼: Originally posted by junminh at 2012-09-26 08:07:48
个人感觉仪器问题可能性较大

我感觉是做的问题，优化一下反应条件吧
反应体系没有特殊要求就不要做那么多了
20足够了
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
4楼2012-09-26 08:50:55
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子衿物语

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个一般是25ul体系，这个曲线应该表明你的引物不行，浓度太低了
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5楼2012-09-28 09:42:10
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桃李之乐

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

我最近在做的qpcr也出现和楼主一样的问题，准备尝试提高模板浓度与提高循环数试试
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反观自省
6楼2012-10-23 13:55:43
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 鼓励应助，分子生物版块，期待你的精彩。 2013-04-01 22:39:57
这个问题，我觉得很泛，我遇到过这样的问题，甚至比你这个曲线更夸张，个人感觉有以下几个可能：

1）引物探针问题：包括引物探针设计不理想、有
2）体系问题：我指的体系大部分应该是你所用的reaction buffer，换换buffer，或许有改观
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7楼2012-10-23 15:50:55
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pillow2012

新虫 (初入文坛)
real time pcr为什么会饱和达到一个峰值？就是s型曲线的平台是怎么回事？
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8楼2013-04-01 21:06:52
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