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pku_xiaoxj

铜虫 (初入文坛)

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[求助] 求助 real-time PCR 曲线弯折问题

PCR扩增曲线如图所示，50uL体系，人类基因组DNA 50ng ，引物25 pmol 。扩增曲线上升一段后出现拐点，求指导~谢谢~

fh.png

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1楼 2012-09-25 17:59:35

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love_st

金虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 鼓励应助，分子生物版块，期待你的精彩。 2013-04-01 22:39:57

这个问题，我觉得很泛，我遇到过这样的问题，甚至比你这个曲线更夸张，个人感觉有以下几个可能：

1）引物探针问题：包括引物探针设计不理想、有
2）体系问题：我指的体系大部分应该是你所用的reaction buffer，换换buffer，或许有改观

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7楼2012-10-23 15:50:55

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atlanticwi

金虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
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小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-09-26 14:26:30

嗯..........................
   没见过这样的曲线，只见过S型扩增，一般会认为是体系与引物问题，这说的就太泛了。
   但是个人觉得你50uL体系太大了吧，我记得某些厂家推荐的都没有这么高（要知道厂家都是推荐偏大体系的），本实验室一般10uL足矣，最高只试过20uL。不明白你50uL有什么特殊用途.........
   个人感觉需要优化你的体系

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