应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助 real-time PCR 曲线弯折 问题
81/1返回列表
查看: 1878  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

pku_xiaoxj

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助 real-time PCR 曲线弯折 问题

PCR扩增曲线如图所示，50uL体系，人类基因组DNA 50ng ， 引物25 pmol 。扩增曲线上升一段后出现拐点，求指导~谢谢~

fh.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-09-25 17:59:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-09-26 14:26:30
嗯..........................
       没见过这样的曲线，只见过S型扩增，一般会认为是体系与引物问题，这说的就太泛了。
       但是个人觉得你50uL体系太大了吧，我记得某些厂家推荐的都没有这么高（要知道厂家都是推荐偏大体系的），本实验室一般10uL足矣，最高只试过20uL。不明白你50uL有什么特殊用途.........
       个人感觉需要优化你的体系
赞一下 回复此楼
Let God do with it as He wills
2楼2012-09-25 23:50:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

junminh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人感觉仪器问题可能性较大
赞一下 回复此楼
3楼2012-09-26 08:07:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

475502411

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-26 14:26:41
引用回帖:
3楼: Originally posted by junminh at 2012-09-26 08:07:48
个人感觉仪器问题可能性较大

我感觉是做的问题，优化一下反应条件吧
反应体系没有特殊要求就不要做那么多了
20足够了
赞一下 回复此楼
可以朝九晚五，也能浪迹天涯
4楼2012-09-26 08:50:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

子衿物语

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个一般是25ul体系，这个曲线应该表明你的引物不行，浓度太低了
赞一下 回复此楼
5楼2012-09-28 09:42:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

桃李之乐

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

我最近在做的qpcr也出现和楼主一样的问题，准备尝试提高模板浓度与提高循环数试试
赞一下 回复此楼
反观自省
6楼2012-10-23 13:55:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 鼓励应助，分子生物版块，期待你的精彩。 2013-04-01 22:39:57
这个问题，我觉得很泛，我遇到过这样的问题，甚至比你这个曲线更夸张，个人感觉有以下几个可能：

1）引物探针问题：包括引物探针设计不理想、有
2）体系问题：我指的体系大部分应该是你所用的reaction buffer，换换buffer，或许有改观
赞一下 回复此楼
7楼2012-10-23 15:50:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pillow2012

新虫 (初入文坛)
real time pcr为什么会饱和达到一个峰值？就是s型曲线的平台是怎么回事？
赞一下 回复此楼
8楼2013-04-01 21:06:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 pku_xiaoxj 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +37 医学老男孩 2026-08-13 86/4300 2026-08-18 00:18 by longsantaizi
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +4 基诺咪客 2026-08-17 4/200 2026-08-17 16:10 by Vivilian
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭