应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于real time PCR 的问题！
41/1返回列表
查看: 816  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ideal9268

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于real time PCR 的问题！ 已有2人参与

用ABI 7000做real time PCR，TAKARA（SYBR）的试剂。结果内参没溶解曲线和扩增曲线，倒是另外的一个基因扩增正常。跑电泳有条带，与预计大小相同（绝对不是引物二聚体）。之前试过这些引物，都能扩出来的。如果说是模板的问题，为什么有的基因就扩出来的？有没有高手知道这是怎么回事啊？万分感谢！

祝大家元旦快乐！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-01-01 21:20:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

翱宇

禁虫 (正式写手)

将军
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+3):谢谢交流 2011-01-02 13:18:13
你引物的问题吧，或者建议换一个内参基因。我曾做的实验，引物退火温度很高，Tm值在70左右，真正选择63度退火。两个引物之间的条带大小为200bp左右，一般溶解曲线等都很好！
内参的引物是不好选择的，保守性高，建议多设计几对引物，选择效果好的使用。而且最好RNA消化基因组DNA，然后再次抽提，选取2ugRNA作逆转录，将cDNA稀释40倍，使用！
建议做四个技术重复。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-01-01 21:54:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ideal9268

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 翱宇 at 2011-01-01 21:54:08:
你引物的问题吧，或者建议换一个内参基因。我曾做的实验，引物退火温度很高，Tm值在70左右，真正选择63度退火。两个引物之间的条带大小为200bp左右，一般溶解曲线等都很好！
内参的引物是不好选择的，保守性高， ...

这个内参的引物前几天刚用过，没问题，效果还很好。这次PCR的条件也和上次完全一样。
还是谢谢你！
赞一下 回复此楼
3楼2011-01-01 21:58:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ideal9268

铜虫 (小有名气)
没有人知道吗？必须解决这个问题啊！期待中······
赞一下 回复此楼
4楼2011-01-02 17:29:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ideal9268 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭