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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » ChIP结果的Realtime检测
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大风吹

银虫 (小有名气)

[求助] ChIP结果的Realtime检测

最近在做ChIP  实验室传统做法是最后做个常规PCR 跑胶鉴定 我想学习一下用Realtime的方式检测结果 是要做个标准曲线什么的吧 具体怎么分组 操作 哪位知道 望不吝赐教 非常感谢
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1楼 2013-03-17 21:42:47
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hy_sandra

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-03-22 12:39:16
大风吹: 金币+18, ★★★很有帮助 2013-06-15 14:46:27
基本上與傳統的一樣，有negative control(通常是IgG)，有positive control(通常是histone)，有input control。不需要做標準曲線，因為最後是要用input作內參，然後在樣本間作比較。只是比較的算法比較不一樣，可以上invitrogen的官網，內有教學

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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科研是無止盡的
2楼2013-03-18 22:08:18
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大风吹

银虫 (小有名气)
感谢  我就是想做标准曲线的那种  希望做过的多多指教
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3楼2013-03-22 10:22:13
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大风吹

银虫 (小有名气)
Invitrogen官网上没找到教学 要不你发个链接给我 还有谁知道双deltaCT法 的模板怎么计算 就是realtime 时模板加多少 谢谢
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4楼2013-03-28 18:10:47
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大风吹

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hy_sandra at 2013-03-18 22:08:18
基本上與傳統的一樣，有negative control(通常是IgG)，有positive control(通常是histone)，有input control。不需要做標準曲線，因為最後是要用input作內參，然後在樣本間作比較。只是比較的算法比較不一樣，可以上 ...

能不能告诉我 模板怎么加 就是模板量要不要一致 怎么才算一致 谢谢
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5楼2013-04-01 12:30:42
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ytxy

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
大风吹(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-04-27 20:32:27
http://zh.invitrogen.com/site/cn ... /chip-analysis.html
这个是invitrogen网站上的。
模板加一样的体积就可以了吧？
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6楼2013-04-01 13:08:50
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coo.coo

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

用已知浓度的样品做连续的5个梯度稀释，做出标准曲线。模板浓度很高的需要稀释，将稀释的样品加入你配置的MIX里面，做三个重复就好了。
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7楼2013-04-01 13:52:53
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大风吹

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by coo.coo at 2013-04-01 13:52:53
用已知浓度的样品做连续的5个梯度稀释，做出标准曲线。模板浓度很高的需要稀释，将稀释的样品加入你配置的MIX里面，做三个重复就好了。

Input IgG Anti-目的蛋白 如果这三组需要的稀释梯度不一样  那要怎么计算呢
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8楼2013-04-01 14:18:55
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hy_sandra

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2013-05-31 22:46:16
???????:
5?: Originally posted by ??紵 at 2013-04-01 12:30:42
?????????? ???????? ???????????????? ?????????? лл...

???????DNA????????????????????5ug??????????DNA???????50ul???2ul??real time PCR??Ct????e????????????

[ ????????? http://muchong.com/3g ]
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科研是無止盡的
9楼2013-04-01 21:09:15
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