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wybiology

捐助贵宾 (小有名气)

[求助] 请问pcr产物约为450bp的大小,可以用来做 real time RT-PCR吗? 已有1人参与

如题,我现在设计的引物所能扩增出来的产物只有400多bp的专一性最好,扩增效率也非常理想,所以我想用这对引物做real time pcr, 可以吗?我也试过了设计其他引物来扩增100到200bp左右的产物,但是都不适合做real time pcr.
急,求回复。感谢有经验的高手解答疑惑!
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冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-27 08:05:34
不是的。因为扩增片段的长短的差异会影响逆转录时的效率。同一PCR程序扩增不同大小的片段也会稍有差别。...

哦 谢谢
生命不息奋斗不止
5楼2013-12-27 14:32:31
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-12-26 13:00:35
可以,不要超过500bp,注意内参扩增片段大小要和目的基因片段基本一样大。
2楼2013-12-26 11:04:40
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冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-26 11:04:40
可以,不要超过500bp,注意内参扩增片段大小要和目的基因片段基本一样大。

请问一下  为什么内参需要和目的基因一样大 是因为扩增时间的原因么
生命不息奋斗不止
3楼2013-12-26 19:18:29
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 冷雁孤旅 at 2013-12-26 19:18:29
请问一下  为什么内参需要和目的基因一样大 是因为扩增时间的原因么...

不是的。因为扩增片段的长短的差异会影响逆转录时的效率。同一PCR程序扩增不同大小的片段也会稍有差别。
4楼2013-12-27 08:05:34
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