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wybiology

捐助贵宾 (小有名气)

[求助] 请问pcr产物约为450bp的大小，可以用来做 real time RT-PCR吗？ 已有1人参与

如题，我现在设计的引物所能扩增出来的产物只有400多bp的专一性最好，扩增效率也非常理想，所以我想用这对引物做real time pcr， 可以吗？我也试过了设计其他引物来扩增100到200bp左右的产物，但是都不适合做real time pcr.
急，求回复。感谢有经验的高手解答疑惑！
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1楼 2013-12-26 10:03:26
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wybiology

捐助贵宾 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-26 11:04:40
可以，不要超过500bp，注意内参扩增片段大小要和目的基因片段基本一样大。

谢谢您的回复！
还有一个问题，请问一下。
我有4个基因需要做real time PCR。有两个是150bp的，但是另外两个是450左右的。而我的内参是140bp。那么对于不同长度的目的片段我分两次做应该就没什么影响了吧. 但是我的内参也就140bp,在做450bp的不用内参这样可以吗？
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6楼2013-12-29 15:49:04
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-26 13:00:35
可以，不要超过500bp，注意内参扩增片段大小要和目的基因片段基本一样大。
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2楼2013-12-26 11:04:40
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冷雁孤旅

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-26 11:04:40
可以，不要超过500bp，注意内参扩增片段大小要和目的基因片段基本一样大。

请问一下  为什么内参需要和目的基因一样大 是因为扩增时间的原因么
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生命不息奋斗不止
3楼2013-12-26 19:18:29
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 冷雁孤旅 at 2013-12-26 19:18:29
请问一下  为什么内参需要和目的基因一样大 是因为扩增时间的原因么...

不是的。因为扩增片段的长短的差异会影响逆转录时的效率。同一PCR程序扩增不同大小的片段也会稍有差别。
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4楼2013-12-27 08:05:34
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