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lamborghini_铜虫 (小有名气)
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[交流]
新人做qRT-PCR 引物怎么设计？已有3人参与
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| 之前找同学教我在pubmed里面搜索 各种mRNA的编号以及正向引物和反向引物。我要做几种CYP代谢酶，分别是CYP1A2，CYP2B6，CYP3A4。 我同学告诉我搜索引物的时候要注意看不同种属，我想搜大鼠的CYP2B6但是搜到想要的结果。这里我有个问题：CYP代谢酶的引物需要区分种属吗？在此之前我一直认为人类和大鼠的CYP引物是通用的，做qPCR时不需要更换引物，我想问问各位前辈，关于引物的设计到底要不要区分种属？？ 还有，对于我这种新人来说，不会搜索合适的引物，能否直接用文献里面提供的序列来合成？？ |
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zhouking8758
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下载不同种属的CYP基因序列比较一下，看相似性高不高，序列保不保守。 如果引物区完全一致，那么不同种属的引物就一直。如果引物区高度保守，那么可以设计简并引物，这样不同种属也可以用相同引物。 另外，文献里面的引物通常可以用，不然文章就涉嫌造假了。 最后，可以用引物设计软件来设计适合的引物，在线平台和本地软件都有很多。。。 |
2楼2013-07-13 12:37:50
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