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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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zsdk

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】实时定量pcr引物设计问题?是否一定要跨内含子! 已有3人参与

做qRT-PCR,设计引物时忘了跨内含子,目的片段在编码区,但只是在一个外显子内!现在条件都摸索好了,不想重新设计引物了,并且重新试了下,引物跨最大的内含子,结果软件出来的引物要么不行,要不直接出不来!  如果引物不跨内含子,是不是会有基因组RNA的污染!  我用的是beacon designer7.9设计的
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-04-12 08:29:46
不一定。首先这样子限制很多,经常不能满足。其次,现在的试剂都比较好了,正常操作,一般基因组污染的不多。
2楼2011-04-11 22:28:02
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新人小玥

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
还好吧,不用那么严谨的。因为好多条件,不能一一满足的。
3楼2011-04-16 23:12:49
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cyz20050505

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+2): 很活跃啊,继续加油啊 2011-04-18 08:14:56
你要不想重新设计也行,只要不怕麻烦,就把RNA拿出来用DNA酶消化完全后,反转录新的cDNA就OK,跨内含子设计主要就是避免混有基因组DNA。
4楼2011-04-17 22:29:37
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