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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】荧光定量引物设计应注意哪些问题
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zwx26_2006

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】荧光定量引物设计应注意哪些问题 已有9人参与

请问各位朋友，荧光定量引物与普通PCR引物设计有什么不同啊？
另：我做的基因是一个大家族中的，非常保守，应该根据家族的保守区设计呢，还是根据非保守区设计

[ Last edited by zwx26_2006 on 2010-6-3 at 13:02 ]
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1楼 2010-06-03 12:44:19
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love_st

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
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lstt09nk(金币+2):赞同~~ 2010-06-03 18:50:11
根据你的目的了，你的这个如果是为了检测其特异性，那么当然是在非保守区域了，如果是通检，那么就在保守区域
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2楼2010-06-03 13:13:14
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ben1147

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
要检测特定某个基因的表达量，当然是在非保守区设计了
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3楼2010-06-03 13:24:17
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wywangying169

银虫 (小有名气)
★
amisking(金币+1):good！ 2010-06-03 21:54:45
引物的退火温度不能太低，最好在60度附近
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好好自学，好好工作
4楼2010-06-03 14:17:57
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陶古斯

木虫 (著名写手)
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amisking(金币+1):不错！ 2010-06-03 21:54:53
还有一点就是扩增的长度不用太长，一般120bp就够了。引物设计可以让公司设计。
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5楼2010-06-03 16:47:22
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2009210721

荧光定量引物设计应注意哪些问题

lstt09nk:交流贴请勿纯表~~ 2010-06-03 18:50:58
amisking:严禁纯表情发帖。 2010-06-03 21:55:06
6楼2010-06-03 16:53:26
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85715623

木虫 (正式写手)
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lstt09nk(金币+2):感谢交流~~ 2010-06-03 18:51:19
把A基因所属的基因家族进行blast。找出高度保守区域，设计引物
（长点，退火温度适当高点，特异性好些），把设计好的引物进行e-pcr，看有没有非目的扩增，如果没有，就ok
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7楼2010-06-03 17:17:16
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
同意楼上。此外，RNA样品要进行DNA酶处理，清除基因组污染。
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8楼2010-06-03 17:29:00
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savid888

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by lixg at 2010-06-03 17:29:00:
同意楼上。此外，RNA样品要进行DNA酶处理，清除基因组污染。

也可以跨内含子设计，这样就不用DNA酶处理了
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9楼2010-06-03 21:32:09
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ZOEY21

金虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-06-03 13:24:17:
要检测特定某个基因的表达量，当然是在非保守区设计了

检测基因表达量 我还以为是在保守区设计？ 请问说的是qrt-pcr吗？
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10楼2010-06-03 21:51:16
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