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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR只有引物二聚体，有图
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天外飞仙→顺

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
建议：：：：  增加退火温度试试，，也有可能是模板浓度较少
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我无法改变自己的出生，但我可以决定自己的命运：命中注定我是一个王者，我必须拿出王者的风范！！！
11楼2010-07-06 23:59:03
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lihuijunle

木虫 (正式写手)
谢谢楼上各位了，我再试试
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12楼2010-07-07 18:25:15
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senoy

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以降低退货温度，同时楼主可以分析下目的片段的GC含量，高于60%可以像前面一位说的用宝生物的GC buffer 加LA TAQ酶，
如果不嫌麻烦，可以试一下用DMSO，按25微升PCR总体系各加入（0.5、1.0、1.5、2.0、2.5微升）做5管，呵呵，相信可以P出来的。
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13楼2010-07-07 18:43:02
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clearth

木虫之王 (正式写手)

专业智能视频监控、工业视觉
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我用的引物跟你相同，也是338F，518R，338F上带GC夹，做DGGE吧，这对引物不错，也可以用来扩放线菌。
338F的Tm=61.83℃（不算GC夹），518R的Tm=59.42℃，我感觉你退火温度设60~68℃都太高。
我的退火温度是55℃。一般都没问题的，你可以试试。
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14楼2010-12-29 09:22:01
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cyz20050505

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
就这模样，已经用不着调各种条件了，费那事没多大用处，直接重新设计引物是最方便省事的。个人经验，仅供参考
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15楼2010-12-29 18:17:32
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real339

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
重新做个温度的梯度吧，温度的影响最大。
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天下没有免费的午餐
16楼2010-12-29 21:20:45
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)
模板浓度，循环数。
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生命不息，探索不止。
17楼2010-12-29 22:22:31
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hfkset

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我赞成调整模板的量，稀释梯度，退火温度也做个梯度，麻烦了一点，但应该能摸好体系。生物实验这东西，不要说以前的体系没事，这个说不准的
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18楼2010-12-30 09:59:16
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jerry110

新虫 (小有名气)
调节一下其他的用量
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19楼2010-12-30 10:52:42
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zhaoyilu

禁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
本帖内容被屏蔽
20楼2010-12-30 11:08:44
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