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lihuijunle

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR只有引物二聚体,有图 已有18人参与

如题:所用的引物是F338R518,F338上有GC夹子,直接用来扩增目的片段
以前这个引物我也做过,也扩的不错,体系也是原来的,但是现在每次扩总是出现引物二聚体,没有目的条带,如图所示

请教各位啦,是什么原因?
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senoy

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可以降低退货温度,同时楼主可以分析下目的片段的GC含量,高于60%可以像前面一位说的用宝生物的GC buffer 加LA TAQ酶,
如果不嫌麻烦,可以试一下用DMSO,按25微升PCR总体系各加入(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5微升)做5管,呵呵,相信可以P出来的。
13楼2010-07-07 18:43:02
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gbrillia

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-07-07 06:27:14
可能是模板加的少了,以前我也遇到过的,但是我的目的条带有的,当时调整一下模板的量,并且加的准一些就好了。
2楼2010-07-06 16:27:47
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clare420

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
提高退火温度看看
3楼2010-07-06 16:29:14
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陈思容

铜虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我现在P也是同样的情况
4楼2010-07-06 17:09:26
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