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ZOEY21

金虫 (小有名气)

[求助] 胶回收产物连接后片段大小

酶切产物1%琼脂糖凝胶电泳切胶回收200-1000bp片段,然后连了个接头,再跑PCR扩增后1%琼脂糖凝胶电泳检测竟然出现500-1800bp,这是怎么回事啊?
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ZOEY21

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by loveyjc at 2012-06-26 16:12:16
建议你琼脂糖凝胶电泳切胶回收200-500bp片段,然后连了个接头,再跑PCR扩增后1%琼脂糖凝胶电泳检测看看,这时候差不多可以得到你需要的长度!
   另外,注意割胶时的操作!

谢谢!所以是我切胶的问题吗?我切胶时电泳跑的时间不短啊,Marker的2000和1000bp分的很清楚。关键是我想回收的范围在200-1000bp。我跑PCR后出现1800多是不是说明连接出问题了啊?
3楼2012-06-26 16:27:39
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查看全部 17 个回答

loveyjc

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
ZOEY21: 金币+2, 有帮助 2012-06-26 16:24:52
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-26 16:46:52
建议你琼脂糖凝胶电泳切胶回收200-500bp片段,然后连了个接头,再跑PCR扩增后1%琼脂糖凝胶电泳检测看看,这时候差不多可以得到你需要的长度!
   另外,注意割胶时的操作!
2楼2012-06-26 16:12:16
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
ZOEY21: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-06-27 08:23:56
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-06-27 13:37:14
小tips: 先跑胶,后染色,能让片段大小被估计更准一些;
注意电流不要过大,温度过高也跑胶结果也有影响
4楼2012-06-26 21:02:26
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ZOEY21

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-06-26 21:02:26
小tips: 先跑胶,后染色,能让片段大小被估计更准一些;
注意电流不要过大,温度过高也跑胶结果也有影响

谢谢!不知道是什么原因,以为是连接体系有问题。跑电泳是稳压120V,太高了吗?今天调低再试试吧...
5楼2012-06-27 08:25:54
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