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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 胶回收产物连接后片段大小
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guaitutu

新虫 (小有名气)
你做的与我所做的很是相似，但是我得到的结果却是大片段中混有小片段，常常是切胶回收300-500bp片段，却总是PCR扩出100-200bp片段，这种情况苦恼了我很长时间，请高人指教，谢谢！
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11楼2012-06-28 09:23:43
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ZOEY21

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by loveyjc at 2012-06-28 09:13:59
是的...

激动啊！ 膜拜啊！我有很多问题啊先问个低级的。关于那个探针，在重复序列前一定要有几个碱基吗？比如CA repeat：biotin-ATAGAATAT ( CA )15。还是在重复序列前直接用生物素修饰就可以了？比如CA repeat：biotin-( CA )15。我看大多文献就是用生物素标记的某某重复，但RAJENDRA P.1994里的探针是前面有碱基序列的。求赐教orz
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12楼2012-06-28 10:34:16
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ZOEY21

金虫 (小有名气)
谢谢楼上的各位！不知我在这回复大家看不看得到。
我加大了胶浓度，调低了电压，跑出了想要的片段。再次谢谢各位大神的帮助
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13楼2012-06-29 14:41:27
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ZOEY21

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by guaitutu at 2012-06-28 09:23:43
你做的与我所做的很是相似，但是我得到的结果却是大片段中混有小片段，常常是切胶回收300-500bp片段，却总是PCR扩出100-200bp片段，这种情况苦恼了我很长时间，请高人指教，谢谢！

不知你的问题解决没 我是跑胶出了问题。加大胶浓度、调低电压就好了。PCR出100-200bp的片段，你确定不是引物二聚体什么的吗
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14楼2012-06-29 14:44:24
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guaitutu

新虫 (小有名气)
???????:
14?: Originally posted by ZOEY21 at 2012-06-29 14:44:24
????????????? ??????????????????????????????????PCR??100-200bp????Σ?????????????????????????...

我曾??都用过4%的胶进行4个??时的电泳，?????过胶回收???的片段??次PCR???，结果还是这样。我觉得这个应该??是引物二???体。
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15楼2012-06-29 15:26:16
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guaitutu

新虫 (小有名气)
我曾??使用4%的胶进行4??时电泳，胶回收???的片段??次PCR，结果还是这样。我觉得这个应该??是引物二???体。
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16楼2012-06-29 15:28:59
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ZOEY21

金虫 (小有名气)
???????:
16?: Originally posted by guaitutu at 2012-06-29 15:28:59
我曾??使用4%的胶进行4??时电泳，胶回收???的片段??次PCR，结果还是这样。我觉得这个应该??是引物二???体。

? ??
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17楼2012-06-29 16:30:41
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