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guaitutu

新虫 (小有名气)

你做的与我所做的很是相似,但是我得到的结果却是大片段中混有小片段,常常是切胶回收300-500bp片段,却总是PCR扩出100-200bp片段,这种情况苦恼了我很长时间,请高人指教,谢谢!
11楼2012-06-28 09:23:43
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ZOEY21

金虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by loveyjc at 2012-06-28 09:13:59
是的...

激动啊! 膜拜啊!我有很多问题啊先问个低级的。关于那个探针,在重复序列前一定要有几个碱基吗?比如CA repeat:biotin-ATAGAATAT ( CA )15。还是在重复序列前直接用生物素修饰就可以了?比如CA repeat:biotin-( CA )15。我看大多文献就是用生物素标记的某某重复,但RAJENDRA P.1994里的探针是前面有碱基序列的。求赐教orz
12楼2012-06-28 10:34:16
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ZOEY21

金虫 (小有名气)

谢谢楼上的各位!不知我在这回复大家看不看得到。
我加大了胶浓度,调低了电压,跑出了想要的片段。再次谢谢各位大神的帮助
13楼2012-06-29 14:41:27
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ZOEY21

金虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by guaitutu at 2012-06-28 09:23:43
你做的与我所做的很是相似,但是我得到的结果却是大片段中混有小片段,常常是切胶回收300-500bp片段,却总是PCR扩出100-200bp片段,这种情况苦恼了我很长时间,请高人指教,谢谢!

不知你的问题解决没 我是跑胶出了问题。加大胶浓度、调低电压就好了。PCR出100-200bp的片段,你确定不是引物二聚体什么的吗
14楼2012-06-29 14:44:24
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guaitutu

新虫 (小有名气)

???????:
14?: Originally posted by ZOEY21 at 2012-06-29 14:44:24
????????????? ??????????????????????????????????PCR??100-200bp????Σ?????????????????????????...

我曾??都用过4%的胶进行4个??时的电泳,?????过胶回收???的片段??次PCR???,结果还是这样。我觉得这个应该??是引物二???体。
15楼2012-06-29 15:26:16
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guaitutu

新虫 (小有名气)

我曾??使用4%的胶进行4??时电泳,胶回收???的片段??次PCR,结果还是这样。我觉得这个应该??是引物二???体。
16楼2012-06-29 15:28:59
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ZOEY21

金虫 (小有名气)

???????:
16?: Originally posted by guaitutu at 2012-06-29 15:28:59
我曾??使用4%的胶进行4??时电泳,胶回收???的片段??次PCR,结果还是这样。我觉得这个应该??是引物二???体。

? ??
17楼2012-06-29 16:30:41
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