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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 胶回收产物连接后片段大小
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ZOEY21

金虫 (小有名气)

[求助] 胶回收产物连接后片段大小

酶切产物1%琼脂糖凝胶电泳切胶回收200-1000bp片段，然后连了个接头，再跑PCR扩增后1%琼脂糖凝胶电泳检测竟然出现500-1800bp，这是怎么回事啊？
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1楼 2012-06-26 14:01:13
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ZOEY21

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by guaitutu at 2012-06-28 09:23:43
你做的与我所做的很是相似，但是我得到的结果却是大片段中混有小片段，常常是切胶回收300-500bp片段，却总是PCR扩出100-200bp片段，这种情况苦恼了我很长时间，请高人指教，谢谢！

不知你的问题解决没 我是跑胶出了问题。加大胶浓度、调低电压就好了。PCR出100-200bp的片段，你确定不是引物二聚体什么的吗
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14楼2012-06-29 14:44:24
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loveyjc

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ZOEY21: 金币+2, ★有帮助 2012-06-26 16:24:52
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-26 16:46:52
建议你琼脂糖凝胶电泳切胶回收200-500bp片段，然后连了个接头，再跑PCR扩增后1%琼脂糖凝胶电泳检测看看，这时候差不多可以得到你需要的长度！
   另外，注意割胶时的操作！
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2楼2012-06-26 16:12:16
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ZOEY21

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by loveyjc at 2012-06-26 16:12:16
建议你琼脂糖凝胶电泳切胶回收200-500bp片段，然后连了个接头，再跑PCR扩增后1%琼脂糖凝胶电泳检测看看，这时候差不多可以得到你需要的长度！
   另外，注意割胶时的操作！

谢谢！所以是我切胶的问题吗？我切胶时电泳跑的时间不短啊，Marker的2000和1000bp分的很清楚。关键是我想回收的范围在200-1000bp。我跑PCR后出现1800多是不是说明连接出问题了啊？
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3楼2012-06-26 16:27:39
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ZOEY21: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-06-27 08:23:56
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-06-27 13:37:14
小tips: 先跑胶，后染色，能让片段大小被估计更准一些；
注意电流不要过大，温度过高也跑胶结果也有影响
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4楼2012-06-26 21:02:26
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