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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 胶回收产物连接后片段大小
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ZOEY21

金虫 (小有名气)

[求助] 胶回收产物连接后片段大小

酶切产物1%琼脂糖凝胶电泳切胶回收200-1000bp片段，然后连了个接头，再跑PCR扩增后1%琼脂糖凝胶电泳检测竟然出现500-1800bp，这是怎么回事啊？
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1楼 2012-06-26 14:01:13
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ZOEY21

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by loveyjc at 2012-06-28 09:13:59
是的...

激动啊！ 膜拜啊！我有很多问题啊先问个低级的。关于那个探针，在重复序列前一定要有几个碱基吗？比如CA repeat：biotin-ATAGAATAT ( CA )15。还是在重复序列前直接用生物素修饰就可以了？比如CA repeat：biotin-( CA )15。我看大多文献就是用生物素标记的某某重复，但RAJENDRA P.1994里的探针是前面有碱基序列的。求赐教orz
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12楼2012-06-28 10:34:16
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loveyjc

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ZOEY21: 金币+2, ★有帮助 2012-06-26 16:24:52
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-26 16:46:52
建议你琼脂糖凝胶电泳切胶回收200-500bp片段，然后连了个接头，再跑PCR扩增后1%琼脂糖凝胶电泳检测看看，这时候差不多可以得到你需要的长度！
   另外，注意割胶时的操作！
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2楼2012-06-26 16:12:16
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ZOEY21

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by loveyjc at 2012-06-26 16:12:16
建议你琼脂糖凝胶电泳切胶回收200-500bp片段，然后连了个接头，再跑PCR扩增后1%琼脂糖凝胶电泳检测看看，这时候差不多可以得到你需要的长度！
   另外，注意割胶时的操作！

谢谢！所以是我切胶的问题吗？我切胶时电泳跑的时间不短啊，Marker的2000和1000bp分的很清楚。关键是我想回收的范围在200-1000bp。我跑PCR后出现1800多是不是说明连接出问题了啊？
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3楼2012-06-26 16:27:39
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ZOEY21: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-06-27 08:23:56
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-06-27 13:37:14
小tips: 先跑胶，后染色，能让片段大小被估计更准一些；
注意电流不要过大，温度过高也跑胶结果也有影响
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4楼2012-06-26 21:02:26
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