应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题
51/1返回列表
查看: 3801  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zhiqiang5070

木虫 (正式写手)

[求助] 胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题

我的cDNA胶回收后条带约1000kb强，之后连接到T载体上（将回收产物与pMD18-T载体16℃连接过夜，胶回收DNA4.5微，T载体 0.5微，SolutionI  5微升），之后转化到天根公司Ｅ.ｃｏｌｉ感受态细胞中，接菌，挑菌后摇菌。之后菌液ＰＣＲ（自己的引物和Ｍ１３引物分别跑了都差不多），可是电泳条带发生改变，出现了２０００多ｋｂ的条带。
各位学长学姐，请问这是怎么回事？好像出现了ｃＤＮＡ自己连接起来的现象。还有如何解决？本人小虫，没啥金币，还望见谅。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验 【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
无善无恶心之体
1楼 2011-06-10 13:56:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

547star

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2314060楼: Originally posted by dnaxxx at 2011-12-13 07:59:21:
2k多的带应该是T载体本身，你的菌液裂解物加多了

没有你的目的条带的话应该是没有连接上

同意.
回复此楼
为什么
8楼2012-05-10 18:56:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

zhiqiang5070

木虫 (正式写手)
上面写错了，我的cDNA为1kb多点，不是1000kb，后面2kb多点，嘿嘿。
赞一下 回复此楼
无善无恶心之体
2楼2011-06-10 14:52:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

healerly

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
3楼2011-06-10 14:56:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

1949stone(EPI+1): epi大神 2011-06-10 15:14:34
zhiqiang5070(金币+3): 你很厉害啊，可能是没连上，剩余的带应该是空载体和非特异性产物 2011-06-13 08:38:28
着实感觉很奇怪，应该是一条1KB的条带。。。
考虑没有连接上的情况，2kb很有可能是非特异性条带；
建议：
1:重新进行连接，我看你的连接体系中DNA有点太多了，可以是载体的2-3倍（浓度，这个需要你跑胶定量的）；
2：将你现在疑似含有重组载体的菌划至平板上，提取质粒，先看看能不能提取出来，能的话再做一个酶切看看。。。
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-06-10 15:07:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭