应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题
21/1返回列表
查看: 3168  |  回复: 8
查看全部回帖@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zhiqiang5070

木虫 (正式写手)

[求助] 胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题

我的cDNA胶回收后条带约1000kb强，之后连接到T载体上（将回收产物与pMD18-T载体16℃连接过夜，胶回收DNA4.5微，T载体 0.5微，SolutionI  5微升），之后转化到天根公司Ｅ.ｃｏｌｉ感受态细胞中，接菌，挑菌后摇菌。之后菌液ＰＣＲ（自己的引物和Ｍ１３引物分别跑了都差不多），可是电泳条带发生改变，出现了２０００多ｋｂ的条带。
各位学长学姐，请问这是怎么回事？好像出现了ｃＤＮＡ自己连接起来的现象。还有如何解决？本人小虫，没啥金币，还望见谅。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验 【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
无善无恶心之体
1楼2011-06-10 13:56:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyancheng

新虫 (初入文坛)
应该是载体的DNA条带；
1）你的载体片段是否在2000-3000bp的范围
2）你的目的片段没有连接成功，培养后增值的知识原来的载体，而无目的片段
建议：
提取质粒，用你的质粒作为对照，与剩余的PCR产物进行电泳，如果质粒的条带与PCR的条带出现亮带的位置一致，则可以确定确实为载体的DNA。
3）建议重新连接转化吧
赞一下 回复此楼
9楼2014-08-13 17:52:24
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhiqiang5070 的主题更新
21/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭