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eagle00768

木虫 (小有名气)

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引用回帖:

9楼: Originally posted by jianghuifu at 2012-03-05 10:41:08:
这样分析有点道理，仪器我们之前还确实出现过这样的问题，下一个问题是，怎么去避免引物二聚体的形成呢，也就是怎么提高合成率呢？

我觉得得优化你的反应条件，设计几个退火温度，找到最合适的，还有你的反应体系。

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11楼2012-03-06 09:20:24

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niushuaiji

金虫 (正式写手)

不放弃的小鸟

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【答案】应助回帖

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最下方隐隐的是引物二聚体，出现所述情况肯定是你的模板中模板dna含量不一样（我不同意是pcr仪的问题），第二个是你的点样也有些问题，最后一个拖尾了，肯定就是样没点好，还有那个含量我认为不能说明什么问题！

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Tobeornottobe,that'saproblem

12楼2012-03-06 10:21:58

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六妖妖

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

我个人认为PCR产物的量不具有太大的意义。与其去测定PCR产物的量，不如去测定DNA或者RNA的质量和完整性。最下方的应该是引物二聚体。可以通过做温度梯度等方法对引物二聚体进行优化。另外我个人不太喜欢做降落式PCR。一般来说不是特别难扩的区域，只要引物设计好，模板质量控制好，都能有很好的分辨效果。还是建议你从引物设计及模板提取2方面入手优化下实验。

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13楼2012-03-06 13:48:14

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