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eagle00768

木虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by jianghuifu at 2012-03-05 10:41:08:
这样分析有点道理,仪器我们之前还确实出现过这样的问题,下一个问题是,怎么去避免引物二聚体 的形成呢,也就是怎么提高合成率呢?

我觉得得优化你的反应条件,设计几个退火温度,找到最合适的,还有你的反应体系。
11楼2012-03-06 09:20:24
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niushuaiji

金虫 (正式写手)

不放弃的小鸟

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
最下方隐隐的是引物二聚体,出现所述情况肯定是你的模板中模板dna含量不一样(我不同意是pcr仪的问题),第二个是你的点样也有些问题,最后一个拖尾了,肯定就是样没点好,还有那个含量我认为不能说明什么问题!
Tobeornottobe,that'saproblem
12楼2012-03-06 10:21:58
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六妖妖

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我个人认为PCR产物的量不具有太大的意义。与其去测定PCR产物的量,不如去测定DNA或者RNA的质量和完整性。最下方的应该是引物二聚体。可以通过做温度梯度等方法对引物二聚体进行优化。另外我个人不太喜欢做降落式PCR。一般来说不是特别难扩的区域,只要引物设计好,模板质量控制好,都能有很好的分辨效果。还是建议你从引物设计及模板提取2方面入手优化下实验。
13楼2012-03-06 13:48:14
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