应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » RT-PCR时GAPDH能跑出来，但目的条带跑不出来~~
51/1返回列表
查看: 3587  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

马龙sweeting

木虫 (正式写手)

[交流] RT-PCR时GAPDH能跑出来，但目的条带跑不出来~~

RT-PCR时GAPDH能跑出来，但目的条带跑不出来~~觉得既然GAPDH能出来，应该说明cDNA没问题吧，那为什么目的基因跑不出来，怀疑是目的基因的引物有问题~~请高手帮忙分析下看可能是什么原因，我给忽略掉了~~难道是因为GAPDH这个基因特别好跑吗~~不过听别人做过的说可以多跑几次就会出来，是这样吗~~请各位帮忙分析下~~
另~~我提的RNA浓度和纯度测得都很好，但是跑出来的三条带5S看不出来，这样反转出来的cDNA没问题吧~~
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

小鱼凶猛

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-03-14 10:00:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

马龙sweeting

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ken126 at 2012-03-15 13:27:46:
引物是自己设计或是引用他人的？目的基因的PCR产物有多大？
另外请问一下，5s是什么？没听说过哦

引物是别人设计的~~PCR产物400~600大小~~
赞一下 回复此楼
3楼2012-03-24 10:07:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

ken126

新虫 (小有名气)
★
马龙sweeting(金币+1): 谢谢参与
引物是自己设计或是引用他人的？目的基因的PCR产物有多大？
另外请问一下，5s是什么？没听说过哦
赞一下 回复此楼
2楼2012-03-15 13:27:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
马龙sweeting(金币+1): 谢谢参与
telomerase: 金币+2, 挺好 2012-03-24 19:56:17
1.RNA按照你的说法23S和18S都很正常并且5S几乎看不到，质量应该是可以的
2.GAPDH是管家基因，含量肯定比你的目的基因要高，它跑出来了说明你的CDNA是没有问题的
3.目的条带没有跑出来不知道是什么样的情况，是完全没有任何东西只跑出了引物二聚体，还是有其他的拖尾的情况出现；假如是完全没有条带只有引物二聚体就要怀疑你的引物特异性或者你的目的基因是否含量很低；假如是有拖尾的情况那就是你退火温度不合适
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-24 11:22:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小鱼凶猛

新虫 (初入文坛)
★
马龙sweeting(金币+1): 谢谢参与
送鲜花一朵
受教了，我也遇到同样的问题。我的是actin跑出来了，但是目的基因没显示，全是引物二聚体！
赞一下 回复此楼
5楼2012-03-29 09:54:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭