应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 相对定量内参基因的Ct值
南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
91/1返回列表
查看: 7050  |  回复: 8
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lixilei1314

金虫 (小有名气)

[交流] 相对定量内参基因的Ct值

1，请教各位，我最近在做荧光定量，一直在纠结一个问题。就是要不要调整mRNA的初始浓度，让最终荧光定量结果的内参基因Actin的Ct值在各个组织中相差不大（貌似最好小于1个循环）？理论上应该是各个组织中Actin的Ct值时相似的吧。
2，小弟都已经做完了，当时没考虑这个问题，做出来的结果，发现Actin的Ct值在各个组织中差异挺大的，最大都到5个循环左右了。现在才又考虑到这个问题了。纠结死了。这样的结果可能会有一定的影响，但还能用不？
请各位不吝赐教！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼2012-07-27 12:50:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vickie20

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
lixilei1314: 金币+2, 好的，谢谢。 2012-07-30 09:00:40
有的人说，RNA最好调一致再做定量，有的说反正做的是相对定量不需要调，这个……我也在纠结中。不过我老师让我把RNA调一致了再做。还有一个说法是，单个内参在各组织各时期并不是总是很稳定，所以要用两个内参……
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-28 10:43:35
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

09丁于飞

银虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
lixilei1314: 金币+2 2012-08-21 17:06:02
如果是在国内发表文章，一般用一个内参就可以，内参在各个组有差异不会有什么影响。但是，若要在国外期刊发表需要做两个内参，并且这两个内参得到的最终结果不能差距太大。
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-28 16:27:08
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

decloud

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by vickie20 at 2012-07-27 14:43:35
有的人说，RNA最好调一致再做定量，有的说反正做的是相对定量不需要调，这个……我也在纠结中。不过我老师让我把RNA调一致了再做。还有一个说法是，单个内参在各组织各时期并不是总是很稳定，所以要用两个内参……

RNA怎么调一致啊，，我都是用nano测得浓度，然后用0.5ug逆转录，结果很悲催的，PCR内参ct差3，，，，
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-30 13:37:11
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vickie20

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by decloud at 2012-07-30 13:37:11
RNA怎么调一致啊，，我都是用nano测得浓度，然后用0.5ug逆转录，结果很悲催的，PCR内参ct差3，，，，...

我先测下浓度，然后再跑胶调亮度，测OD我感觉不靠谱，还是跑胶比较靠谱
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-30 15:21:02
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ice-bamboo

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问楼主最后是怎么解决这个问题的啊，多谢啦
赞一下 回复此楼
6楼2015-06-26 20:33:40
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ice-bamboo

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by decloud at 2012-07-30 13:37:11
RNA怎么调一致啊，，我都是用nano测得浓度，然后用0.5ug逆转录，结果很悲催的，PCR内参ct差3，，，，...

请问大侠是怎么解决内参不一致的问题的啊
赞一下 回复此楼
7楼2015-06-26 20:35:08
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谈误国

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by vickie20 at 2012-07-28 10:43:35
有的人说，RNA最好调一致再做定量，有的说反正做的是相对定量不需要调，这个……我也在纠结中。不过我老师让我把RNA调一致了再做。还有一个说法是，单个内参在各组织各时期并不是总是很稳定，所以要用两个内参……

请问你是怎么调一致的？比如，反转录时RNA都用1ug，之后rt-pcr用的CDNA都用0.1ul这就是调一致了吗？
赞一下 回复此楼
8楼2015-08-10 10:18:25
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

宫保鸡丁YZ

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不知道你是做什么物种的，我觉得你得找几篇外文文献，看看人家做的哪个内参在各个组织器官里表达相对稳定。不一定非要用Actin作为内参。另外，荧光定量PCR的话，我们都是在提好总RNA后，调整RNA的浓度一致，然后逆转录出cDNA,稀释到合理倍数后进行qPCR的。
赞一下 回复此楼
9楼2015-08-10 10:49:07
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lixilei1314 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭