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求助，QRT PCR 用不同内参结果差距很大 已有1人参与
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RT，第一次做QRTPCR，转入P53 SHRNA 的和NON-TARGET SHRNA的对比，都取的1UG的RNA逆转录的，CDNA稀释一倍以后上机PCR的，做了3个重复孔，平行性挺好的相差0.5以内，溶解曲线也都是单峰应该没有引物二聚体，选了两个内参基因ACTIN 和GADPH，按两种内参最后算出来敲除效率一个百分之90多，一个百分之8。。。这是CT值的数据我都三个重复孔平均了的 CONTROL 转入SHRNA P53 25.88 28.43 ACTIN 23.26 22.04 GADPH 21.55 23.98 为什么我同样1UG的RNA反转，内参的CT值查那么多，难道真的这俩基因在对照和实验组里表达差距很大吗，我看文献里敲P53都有拿这俩基因当内参啊啊，纠结死了，应该考虑我是哪一步有问题啊希望大神指点指点，跪谢啊 |
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