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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » RT-PCR过程中内参基因CT值问题
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秋隐vs蚯蚓

铜虫 (初入文坛)

[求助] RT-PCR过程中内参基因CT值问题已有2人参与

第一次做RT-PCR,过程中遇见一些问题希望各位大侠帮忙解决一下！我做相对定量RT-PCR，实验过程中发现，内参基因16s CT值为14，目标基因C值在25左右，我的内参基因CT值过小怎么办，这样的数据是不是不能用，我将模板进行了1:300稀释，CT值变化不是很大，如果进行1:1000稀释的话我担心目标基因CT值过大。

RT-PCR过程中内参基因CT值问题
Amplification Plot.jpg
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1楼2014-06-04 15:22:32
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cuiyangyan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
秋隐vs蚯蚓(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-04 20:01:01
秋隐vs蚯蚓: 金币+2, ★有帮助 2014-06-09 09:04:06
内参14,目的基因25，还好呀，你需要的是一个处理数据的公式，一般网站上都有介绍，一般文章中绣出来的RT-PCR值都是一个相对值。
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用每一次的尝试填满命运的空缺
2楼2014-06-04 16:43:09
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秋隐vs蚯蚓

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cuiyangyan at 2014-06-04 16:43:09
内参14,目的基因25，还好呀，你需要的是一个处理数据的公式，一般网站上都有介绍，一般文章中绣出来的RT-PCR值都是一个相对值。

CT值14太低了吧，不是要求在20-30吗，有人说CT值太低不可信，我就很纠结
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3楼2014-06-05 08:34:57
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
内参的表达量本来就高，这很正常
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4楼2014-06-05 08:37:34
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秋隐vs蚯蚓

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-06-05 08:37:34
内参的表达量本来就高，这很正常

那这样的结果能用吗？
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5楼2014-06-05 09:21:53
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★
秋隐vs蚯蚓(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-06 19:13:41
引用回帖:
5楼: Originally posted by 秋隐vs蚯蚓 at 2014-06-05 09:21:53
那这样的结果能用吗？...

能用，因为你的扩增曲线是真实的，并不是因为早期信号不稳定造成的
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6楼2014-06-05 09:35:31
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ybQuan

金虫 (著名写手)
稀释10倍CT值延后3.3，自己算算怎样合适
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哥在江湖漂，很少不挨刀，不是愿意挨，是哥很无奈!
7楼2014-06-06 16:23:54
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