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821078607

银虫 (小有名气)

[求助] RT-PCR测定基因相对表达

大家好!
    有没有做RT-PCR基因相对定量的虫友,请教一个问题,Ct值多少以后的数据就不可信了呢?
谢谢大家!
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ypan

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-16 13:37:29
一般来说有2个不同的平台来研究定量分析,探针法非常灵敏,但是价格高;染料法,多用SYBR green,价格低,假阳性高。

一般而言Ct值大于35,该实验完全失败,有污染;Ct值小于18,需要稀释模板浓度,20~30之间比较合适。
2楼2012-10-15 17:43:19
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般内参在20左右是比较好的,你的目的基因可能会比内参大点,但是不会太大!
持之以恒、永不放弃!
3楼2012-10-15 18:18:17
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821078607

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ypan at 2012-10-15 17:43:19
一般来说有2个不同的平台来研究定量分析,探针法非常灵敏,但是价格高;染料法,多用SYBR green,价格低,假阳性高。

一般而言Ct值大于35,该实验完全失败,有污染;Ct值小于18,需要稀释模板浓度,20~30之间比 ...

如果我的内参在15左右,目的基因在30附近,这样的数据还是可用的是吗?
4楼2012-10-16 13:57:43
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ypan

木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 821078607 at 2012-10-16 13:57:43
如果我的内参在15左右,目的基因在30附近,这样的数据还是可用的是吗?...

勉强可以用,需要优化。
5楼2012-10-17 17:22:47
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821078607

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by ypan at 2012-10-17 17:22:47
勉强可以用,需要优化。...

一般从哪些方面来考虑对实验进行优化比较好,能说的详细一点吗?谢谢。。。
6楼2012-10-17 19:57:36
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