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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RT-PCR测定基因相对表达
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821078607

银虫 (小有名气)

[求助] RT-PCR测定基因相对表达

大家好！
    有没有做RT-PCR基因相对定量的虫友，请教一个问题，Ct值多少以后的数据就不可信了呢？
谢谢大家！
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1楼 2012-10-15 17:26:05
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ypan

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-16 13:37:29
一般来说有2个不同的平台来研究定量分析，探针法非常灵敏，但是价格高；染料法，多用SYBR green，价格低，假阳性高。

一般而言Ct值大于35，该实验完全失败，有污染；Ct值小于18，需要稀释模板浓度，20～30之间比较合适。
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2楼2012-10-15 17:43:19
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般内参在20左右是比较好的，你的目的基因可能会比内参大点，但是不会太大！
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持之以恒、永不放弃！
3楼2012-10-15 18:18:17
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821078607

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ypan at 2012-10-15 17:43:19
一般来说有2个不同的平台来研究定量分析，探针法非常灵敏，但是价格高；染料法，多用SYBR green，价格低，假阳性高。

一般而言Ct值大于35，该实验完全失败，有污染；Ct值小于18，需要稀释模板浓度，20～30之间比 ...

如果我的内参在15左右，目的基因在30附近，这样的数据还是可用的是吗？
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4楼2012-10-16 13:57:43
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ypan

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 821078607 at 2012-10-16 13:57:43
如果我的内参在15左右，目的基因在30附近，这样的数据还是可用的是吗？...

勉强可以用，需要优化。
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5楼2012-10-17 17:22:47
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821078607

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ypan at 2012-10-17 17:22:47
勉强可以用，需要优化。...

一般从哪些方面来考虑对实验进行优化比较好，能说的详细一点吗？谢谢。。。
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6楼2012-10-17 19:57:36
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