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秋隐vs蚯蚓

铜虫 (初入文坛)

[求助] RT-PCR过程中内参基因CT值问题 已有2人参与

第一次做RT-PCR,过程中遇见一些问题希望各位大侠帮忙解决一下!我做相对定量RT-PCR,实验过程中发现,内参基因16s CT值为14,目标基因C值在25左右,我的内参基因CT值过小怎么办,这样的数据是不是不能用,我将模板进行了1:300稀释,CT值变化不是很大,如果进行1:1000稀释的话我担心目标基因CT值过大。

RT-PCR过程中内参基因CT值问题
Amplification Plot.jpg
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)


秋隐vs蚯蚓(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-06 19:13:41
引用回帖:
5楼: Originally posted by 秋隐vs蚯蚓 at 2014-06-05 09:21:53
那这样的结果能用吗?...

能用,因为你的扩增曲线是真实的,并不是因为早期信号不稳定造成的
6楼2014-06-05 09:35:31
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查看全部 7 个回答

cuiyangyan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
秋隐vs蚯蚓(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-04 20:01:01
秋隐vs蚯蚓: 金币+2, 有帮助 2014-06-09 09:04:06
内参14,目的基因25,还好呀,你需要的是一个处理数据的公式,一般网站上都有介绍,一般文章中绣出来的RT-PCR值都是一个相对值。
用每一次的尝试填满命运的空缺
2楼2014-06-04 16:43:09
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秋隐vs蚯蚓

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cuiyangyan at 2014-06-04 16:43:09
内参14,目的基因25,还好呀,你需要的是一个处理数据的公式,一般网站上都有介绍,一般文章中绣出来的RT-PCR值都是一个相对值。

CT值14太低了吧,不是要求在20-30吗,有人说CT值太低不可信,我就很纠结
3楼2014-06-05 08:34:57
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
内参的表达量本来就高,这很正常
4楼2014-06-05 08:37:34
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