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lixilei1314

金虫 (小有名气)


[交流] 相对定量内参基因的Ct值

1,请教各位,我最近在做荧光定量,一直在纠结一个问题。就是要不要调整mRNA的初始浓度,让最终荧光定量结果的内参基因Actin的Ct值在各个组织中相差不大(貌似最好小于1个循环)?理论上应该是各个组织中Actin的Ct值时相似的吧。
2,小弟都已经做完了,当时没考虑这个问题,做出来的结果,发现Actin的Ct值在各个组织中差异挺大的,最大都到5个循环左右了。现在才又考虑到这个问题了。纠结死了。这样的结果可能会有一定的影响,但还能用不?
请各位不吝赐教!
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宫保鸡丁YZ

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不知道你是做什么物种的,我觉得你得找几篇外文文献,看看人家做的哪个内参在各个组织器官里表达相对稳定。不一定非要用Actin作为内参。另外,荧光定量PCR的话,我们都是在提好总RNA后,调整RNA的浓度一致,然后逆转录出cDNA,稀释到合理倍数后进行qPCR的。
9楼2015-08-10 10:49:07
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vickie20

铜虫 (小有名气)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
lixilei1314: 金币+2, 好的,谢谢。 2012-07-30 09:00:40
有的人说,RNA最好调一致再做定量,有的说反正做的是相对定量不需要调,这个……我也在纠结中。不过我老师让我把RNA调一致了再做。还有一个说法是,单个内参在各组织各时期并不是总是很稳定,所以要用两个内参……
2楼2012-07-28 10:43:35
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09丁于飞

银虫 (初入文坛)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
lixilei1314: 金币+2 2012-08-21 17:06:02
如果是在国内发表文章,一般用一个内参就可以,内参在各个组有差异不会有什么影响。但是,若要在国外期刊发表需要做两个内参,并且这两个内参得到的最终结果不能差距太大。
3楼2012-07-28 16:27:08
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decloud

木虫 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by vickie20 at 2012-07-27 14:43:35
有的人说,RNA最好调一致再做定量,有的说反正做的是相对定量不需要调,这个……我也在纠结中。不过我老师让我把RNA调一致了再做。还有一个说法是,单个内参在各组织各时期并不是总是很稳定,所以要用两个内参……

RNA怎么调一致啊,,我都是用nano测得浓度,然后用0.5ug逆转录,结果很悲催的,PCR内参ct差3,,,,
4楼2012-07-30 13:37:11
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