24小时热门版块排行榜

返回列表

rriangle

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 4.5
帖子: 8
在线: 1.2小时
虫号: 2859161
注册: 2013-12-06

[求助] 求帮忙！！目的基因Ct值很高已有2人参与

本人是新手，最近在做荧光定量PCR，用的是THERMO公司的仪器，cDNA稀释10倍后，内参GADPH ct值都在25左右，但是几个目的基因都在30多，要不然就是非数字，然后我又把cDNA稀释5倍，GADPH ct值在15左右，目的基因还是在30多，要不然就是非数字，好不容易有个目的基因跑出来了，结果实验组的相对量比对照组还低，我想知道是引物不好么？我的引物是生工的，还有内参跑出来了是不是说明我的cDNA没有问题？因为我是组织，以前也没做过，我怕被我污染了，多谢各位大神赐教啊。。。！！！

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

求助引物设计和载体构建问题已经有6人回复
定量PCR 目的基因CT值比内参高已经有3人回复
荧光定量PCR中，结果内参基因的CT值有，但是目的基因的CT值没有，怎么办已经有20人回复
RT-PCR过程中内参基因CT值问题已经有6人回复
用ΔΔCt法做相对定量，目的和内参基因可以使用不同的体系吗？已经有3人回复
定量PCR结果分析已经有3人回复
基因PCR结果图分析已经有9人回复
做荧光定量PCR,如果对照组的目的基因不表达,在采用2-△△Ct时怎么处理数据已经有6人回复
荧光定量PCR的相对定量怎么用？已经有5人回复
内参基因评价软件NormFinder原理和Ct值转换已经有5人回复
怎么做实时定量pcr？已经有7人回复
求高手帮忙看看这个质粒图谱！我目的基因的启动子和终止子各是什么喃？已经有12人回复
荧光定量扩增效率问题已经有6人回复
为什么荧光定量PCR扩增曲线呈倒S型已经有27人回复
QPCR之扩增效率已经有8人回复
使用多对引物进行实时定量PCR后未得到实验结果，是否能说明目的基因不表达？已经有10人回复
实时荧光定量相对定量标准曲线的问题已经有10人回复
做荧光定量时看家基因的CT值？已经有8人回复
荧光定量PCR-绝对定量已经有4人回复
QPCR扩增效率太低已经有20人回复
荧光定量内参基因引物的设计已经有6人回复
相对定量内参基因的Ct值已经有8人回复
关于管家基因Ct值已经有7人回复
荧光pcr标准曲线问题已经有21人回复
两次QPCR前后目的基因的CT值不一样已经有6人回复

1楼 2014-09-19 12:53:04

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

yzj926521

新虫 (小有名气)

应助: 38 (小学生)
金币: 694.3
红花: 3
帖子: 64
在线: 41.5小时
虫号: 3291267
注册: 2014-06-25
性别: MM
专业: 动物遗传学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

目的基因表达量太低了，试一下2倍稀释或者用25ul体系扩增，多换条件试试吧
我最近做的一个基因也是表达量很低,ct都大于30了，正在调整中

赞一下

回复此楼

2楼2014-09-19 16:54:24

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

bullfrog325

木虫 (正式写手)

MolEPI: 1
应助: 193 (高中生)
金币: 2880.3
散金: 200
红花: 24
帖子: 744
在线: 269.5小时
虫号: 1864929
注册: 2012-06-20

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-19 23:49:23

"cDNA稀释10倍后，内参GADPH ct值都在25左右" vs. "又把cDNA稀释5倍，GADPH ct值在15左右"

楼主你到PCR很有问题，不可能两倍的模版浓度会产生这么大的Ct差距

赞一下

回复此楼

3楼2014-09-19 19:38:25

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

rriangle

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 4.5
帖子: 8
在线: 1.2小时
虫号: 2859161
注册: 2013-12-06

引用回帖:

3楼: Originally posted by bullfrog325 at 2014-09-19 19:38:25
"cDNA稀释10倍后，内参GADPH ct值都在25左右" vs. "又把cDNA稀释5倍，GADPH ct值在15左右"

楼主你到PCR很有问题，不可能两倍的模版浓度会产生这么大的Ct差距

那到底是哪里出现问题了呢`

赞一下

回复此楼

4楼2014-09-28 22:37:56

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖