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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR的相对定量怎么用？
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不离不弃1215

铜虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR的相对定量怎么用？

各位大侠：我是研一，上无师兄师姐的帮助，老师又没有用过荧光定量PCR，所以什么都要自己来。最近想做个实验，比较一个脐橙叶片样品中两种基因的表达。我觉得能用相对定量来做，可是我不知道具体怎么做。话说要有一个管家基因，每个样品做一个管家基因，可是怎么设置呢？管家基因座作为未知样？是单独做一个空？还是怎么弄的？不懂........。他如何做到消除基因组的干扰的？
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1楼 2013-08-13 16:30:16
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yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-08-13 17:17:33
管家基因是用来定量的。用来计算相对表达量。管家基因在相同量样品中的表达量我们认为是一致的。然后根据这个量来计算你的基因在不同样品中的表达量。所以每一个都需要单独的样品。基因组干扰需要你在提取RNA以后用DNase处理样品。如果不放心，可以拿处理过的RNA做膜版，跑一次，如果有带就是有污染，如果没有可以合成cDNA库了。
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Let'sdoit.
2楼2013-08-13 17:06:44
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shzhao113

禁虫 (著名写手)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 感谢发帖应助，帮助虫子 2013-08-13 18:38:18
本帖内容被屏蔽
3楼2013-08-13 17:52:59
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不离不弃1215

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yimingwang at 2013-08-13 17:06:44
管家基因是用来定量的。用来计算相对表达量。管家基因在相同量样品中的表达量我们认为是一致的。然后根据这个量来计算你的基因在不同样品中的表达量。所以每一个都需要单独的样品。基因组干扰需要你在提取RNA以后用 ...

哇，太谢谢你了。可是我要在不同样品中比较两个基因的表达量，是不是可以一次完成呢？我的基因是DNA，所以是不是考虑你说的基因组干扰？
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4楼2013-08-14 15:42:48
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yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
不离不弃1215(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-15 17:01:09
可以一次完成。同时跑两组，一组是house keeping, 一组是你的特异primer. 都跑两个样品，然后根据荧光定量，计算你基因的相对表达量。
基因肯定是DNA,跟我说干扰不是一个概念。我所谓的干扰是指你提取的RNA样品中有DNA污染，从而无法得到正确结果。
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Let'sdoit.
5楼2013-08-14 18:03:19
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不离不弃1215

铜虫 (小有名气)
太谢谢了，我想我大概明白这么回事了，明天就???一下，看看结果如何。

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6楼2013-08-15 00:02:34
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