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不离不弃1215

铜虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR的相对定量怎么用?

各位大侠:我是研一,上无师兄师姐的帮助,老师又没有用过荧光定量PCR,所以什么都要自己来。最近想做个实验,比较一个脐橙叶片样品中两种基因的表达。我觉得能用相对定量来做,可是我不知道具体怎么做。话说要有一个管家基因,每个样品做一个管家基因,可是怎么设置呢?管家基因座作为未知样?是单独做一个空?还是怎么弄的?不懂........。他如何做到消除基因组的干扰的?
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yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-08-13 17:17:33
管家基因是用来定量的。用来计算相对表达量。管家基因在相同量样品中的表达量我们认为是一致的。然后根据这个量来计算你的基因在不同样品中的表达量。所以每一个都需要单独的样品。基因组干扰需要你在提取RNA以后用DNase处理样品。如果不放心,可以拿处理过的RNA做膜版,跑一次,如果有带就是有污染,如果没有可以合成cDNA库了。
Let'sdoit.
2楼2013-08-13 17:06:44
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shzhao113

禁虫 (著名写手)

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 感谢发帖应助,帮助虫子 2013-08-13 18:38:18
本帖内容被屏蔽

3楼2013-08-13 17:52:59
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不离不弃1215

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yimingwang at 2013-08-13 17:06:44
管家基因是用来定量的。用来计算相对表达量。管家基因在相同量样品中的表达量我们认为是一致的。然后根据这个量来计算你的基因在不同样品中的表达量。所以每一个都需要单独的样品。基因组干扰需要你在提取RNA以后用 ...

哇,太谢谢你了。可是我要在不同样品中比较两个基因的表达量,是不是可以一次完成呢?我的基因是DNA,所以是不是考虑你说的基因组干扰?
4楼2013-08-14 15:42:48
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yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
不离不弃1215(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-15 17:01:09
可以一次完成。同时跑两组,一组是house keeping, 一组是你的特异primer. 都跑两个样品,然后根据荧光定量,计算你基因的相对表达量。
基因肯定是DNA,跟我说干扰不是一个概念。我所谓的干扰是指你提取的RNA样品中有DNA污染,从而无法得到正确结果。
Let'sdoit.
5楼2013-08-14 18:03:19
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不离不弃1215

铜虫 (小有名气)

太谢谢了,我想我大概明白这么回事了,明天就???一下,看看结果如何。

[ ????????? http://muchong.com/3g ]
6楼2013-08-15 00:02:34
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