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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求帮忙！！目的基因Ct值很高
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rriangle

新虫 (初入文坛)

[求助] 求帮忙！！目的基因Ct值很高 已有2人参与

本人是新手，最近在做荧光定量PCR，用的是THERMO公司的仪器，cDNA稀释10倍后，内参GADPH ct值都在25左右，但是几个目的基因都在30多，要不然就是非数字，然后我又把cDNA稀释5倍，GADPH ct值在15左右，目的基因还是在30多，要不然就是非数字，好不容易有个目的基因跑出来了，结果实验组的相对量比对照组还低，我想知道是引物不好么？我的引物是生工的，还有内参跑出来了是不是说明我的cDNA没有问题？因为我是组织，以前也没做过，我怕被我污染了，多谢各位大神赐教啊。。。！！！
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1楼 2014-09-19 12:53:04
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南宫紫玉

新虫 (正式写手)
我也遇到了类似的情况，不过我的cDNA质量应该没有问题，跑出来的内参Ｃｔ值在２５左右，感觉不是很好，一直想调低一点呢！做了几个月了，试了好多方法，还正在摸索中．．．．．
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6楼2015-07-28 23:50:57
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yzj926521

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
目的基因表达量太低了，试一下2倍稀释或者用25ul体系扩增，多换条件试试吧
我最近做的一个基因也是表达量很低,ct都大于30了，正在调整中
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2楼2014-09-19 16:54:24
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bullfrog325

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-19 23:49:23
"cDNA稀释10倍后，内参GADPH ct值都在25左右" vs. "又把cDNA稀释5倍，GADPH ct值在15左右"

楼主你到PCR很有问题， 不可能两倍的模版浓度会产生这么大的Ct差距
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3楼2014-09-19 19:38:25
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rriangle

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by bullfrog325 at 2014-09-19 19:38:25
"cDNA稀释10倍后，内参GADPH ct值都在25左右" vs. "又把cDNA稀释5倍，GADPH ct值在15左右"

楼主你到PCR很有问题， 不可能两倍的模版浓度会产生这么大的Ct差距

那到底是哪里出现问题了呢`
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4楼2014-09-28 22:37:56
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