应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做荧光定量时看家基因的CT值？
91/1返回列表
查看: 2404  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

cnb1987

银虫 (小有名气)

[求助] 做荧光定量时看家基因的CT值？

大家好，最近在做荧光定量，做了几次之后，发现看家基因的CT值都在30左右，是不是我的模版量加的太少还是cDNA有问题？，一般三个重复三个，有的品均值值还在33左右，大家能给我点意见么？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-03-08 11:12:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cnb1987: 金币+2, ★有帮助 2013-03-08 12:26:05
PCR时加大cDNA用量或者逆转录时增加RNA用量。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-03-08 11:14:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhs521521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cnb1987: 金币+2, ★有帮助 2013-03-08 12:26:31
那个CT值是和cDNA量相反关系，CT值越大说明模板浓度低，加大模板量，而且CT值在25-33，个人认为都可以！
赞一下(1人) 回复此楼
寻找真正的自我！
3楼2013-03-08 11:36:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cnb1987: 金币+2, ★有帮助 2013-03-08 12:26:44
管家基因的ct值都在30左右的话说明你的cNDA含量较低，PCR本身没有问题，解决方法上面的两位说的都很有理
赞一下(1人) 回复此楼
生物化学与分子生物学
4楼2013-03-08 11:58:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cnb1987

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-08 11:14:16
PCR时加大cDNA用量或者逆转录时增加RNA用量。

嗯，好的，我再加点模版尝试一下！
赞一下 回复此楼
5楼2013-03-08 12:25:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hy_sandra

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cnb1987: 金币+4, ★★★★★最佳答案 2013-03-08 17:00:32
小丹木木: 金币+5, 鼓励应助，欢迎新虫虫 2013-03-08 17:33:12
加模版通常變動不大，因螢光R值是取10的對數?K對應至ct，所以就算增量2倍，螢光增加兩倍，也只會增加約0.3個ct。所以要看，你的看家基因產物大小，一般不要超過300bp為佳，再?硪茨阍O的programe, 也許要改一下比較適合。可以把你的條件寫一下，大家可幫忙

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(1人) 回复此楼
科研是無止盡的
6楼2013-03-08 15:22:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cnb1987

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by hy_sandra at 2013-03-08 15:22:40
加模版通常變動不大，因螢光R值是取10的對數?K對應至ct，所以就算增量2倍，螢光增加兩倍，也只會增加約0.3個ct。所以要看，你的看家基因產物大小，一般不要超過300bp為佳，再?硪茨阍O的programe, 也許要改一下比較 ...

好的！
我20ul 体系 模版加0.8ul
Stage 1 95℃  5min
Stage 2(Reps 40) 95℃  15s, 58℃  15s, 72℃  30s
Stage3 95℃ 15s, 60℃ 30s, 95℃ 15s
产物都很小都是一百左右！
赞一下 回复此楼
7楼2013-03-08 17:00:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hy_sandra

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

一般?碚f，用2ugRNA轉成cDNA(體積為20ul)，拿1ul作real time PCR，其actin約為18~22ct,而GAPDH則多一點會到25ct左右。看了一下，programe應沒太大問題, 只是annealing溫度若是高於50度，我的時間不會設這麼短，至少也20秒。也許你可以先用一般pcr後再跑gel看看，可以確定programe及產物沒問題。還有，我的經驗是，若當初提取RNA後,回溶的體積太大，以致於定量的的OD小於0.3，以至於之後的ct會變多很多

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(1人) 回复此楼
科研是無止盡的
8楼2013-03-09 15:53:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨童旺

新虫 (小有名气)
亲，你最后怎么解决的啊，教教我把
赞一下 回复此楼
向着自己的目标冲吧！
9楼2014-12-11 12:51:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cnb1987 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 环境工程调剂 +4 大可digkids 2026-03-16 4/200 2026-03-16 14:00 by laoshidan
[考研] 283求调剂 +8 小楼。 2026-03-12 11/550 2026-03-16 09:46 by 无际的草原
[考研] 东南大学364求调剂 +4 JasonYuiui 2026-03-15 4/200 2026-03-16 08:36 by Linda Hu
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +6 一鸭鸭哟 2026-03-14 7/350 2026-03-15 22:12 by Winj1e
[文学芳草园] 伙伴们，祝我生日快乐吧 +15 myrtle 2026-03-10 24/1200 2026-03-15 21:16 by 苏州_逗号
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习 +3 Losir 2026-03-12 3/150 2026-03-14 12:11 by 热情沙漠
[考研] 云南财经大学信息学院计算机学硕专硕学位点 +3 zjptai 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:23 by 飞行琦
[考研] 0856材料与化工309分求调剂 +6 ZyZy…… 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:38 by JourneyLucky
[考研] 318求调剂 +3 李新光 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:21 by JourneyLucky
[考研] 2026考研调剂+本科延边大学+山东大学+生物化学与分子生物学+有项目经验 +3 ccdsscjy 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:12 by JourneyLucky
[考研] 285 求调剂 资源与环境 一志愿北京化工大学 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:04 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工求调剂一志愿 985 总分 295 +8 dream…… 2026-03-12 8/400 2026-03-13 22:17 by 星空星月
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 285化工学硕求调剂（081700） +6 柴郡猫_ 2026-03-12 6/300 2026-03-13 20:46 by hmn_wj
[考研] 工科调剂 +4 Jiang191123！ 2026-03-11 4/200 2026-03-13 15:15 by Miko19
[论文投稿] 投稿问题 5+4 星光灿烂xt 2026-03-12 6/300 2026-03-13 14:17 by god_tian
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 哈工大材料324求调剂 +6 闫旭东 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:49 by 星空星月
[考博] 26申博求助 +3 跳跃饼干 2026-03-10 4/200 2026-03-10 21:15 by Tntcnn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭