24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2890  |  回复: 3

lmc2537

铜虫 (小有名气)

[求助] 为什么qpcr目的基因和内参跑出来的胶不一样亮 已有1人参与

有一个疑问,既然目的基因和内参都到了平台期,为什么跑出来的条带不一样亮,我跑了39个循环,内参15个循环到达指数期,目的基因25个循环到达指数期,但是他们都在39个循环之前到达了平台期,且荧光强度一样,那么为什么我跑胶的话,内参条带的亮度远大于目的基因?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-10-02 21:12:47
lmc2537: 金币+5, 有帮助 2014-10-03 21:49:29
信息不够全,我假设你用Taqman探针法,
在这样的情况下,最终你检测的信号不是PCR产物信号,而是探针水解后的信号,总的信号取决于你探针的总量。如果内标和目的探针浓度一样,所以最终检测信号一样。尽管你内参产物更浓,可是已经没有足够多的探针来显示了,饱和了。
按照你提供的信息,你的内标更早的达到饱和。
行至水穷处,坐看云起时
2楼2014-10-02 20:50:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lmc2537

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2014-10-02 20:50:12
信息不够全,我假设你用Taqman探针法,
在这样的情况下,最终你检测的信号不是PCR产物信号,而是探针水解后的信号,总的信号取决于你探针的总量。如果内标和目的探针浓度一样,所以最终检测信号一样。尽管你内参产 ...

谢谢你的回答,我用的是SYBR染料法,所以荧光强度跟扩增产物有关,染料应该是充足的,不存在不够的情况,的确内参先达到饱和,但是结果最后都是达到饱和,为什么跑胶的亮度会不一样?(扩增产物长度只差几十bp)
3楼2014-10-03 21:49:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-03 22:19:48
这和机器相关,机器读荧光的时候也是有一个范围的,条件允许的话,可以把sybr green逐步掺入浓度很高的质粒或PCR产物,然后放入机器里面读,会有一个上限。

如果达到这个上限后,再增加荧光物质(sybr green),阅读值已经饱和了。

一个不太恰当的比喻,你用一个量程为100g的称,所有超过100g的东西,最后都只能显示为100g
行至水穷处,坐看云起时
4楼2014-10-03 22:11:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lmc2537 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 0856材料化工求调剂,一志愿211,初试成绩349 +3 江淮北月 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:31 by 啵啵啵0119
[考研] 本科211,293分请求调剂 +8 莲菜就是藕吧 2026-04-03 9/450 2026-04-05 19:12 by 蓝云思雨
[考研] 22408 总分320,一篇论文二作,两个国三,求调剂 +3 Leomulufu 2026-04-04 5/250 2026-04-05 19:04 by chongya
[考研] 085500机械专硕初试288求调剂 +3 GZJguo666- 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:06 by jkddd
[考研] 085600调剂 +9 东照照照 2026-04-04 9/450 2026-04-05 13:44 by ujn_zhuj
[考研] 070300化学求调剂 +17 小黄鸭宝 2026-03-30 17/850 2026-04-05 12:03 by 宁馨哈哈
[考研] 数一英一274机械调剂 +5 星陨流霞 2026-04-04 6/300 2026-04-05 11:38 by arrow8852
[考研] 283分求调剂 +9 试试看呗 2026-04-04 9/450 2026-04-05 10:27 by 果冻大王
[考研] 一志愿华中农业大学0710(A)初试329分 求调剂 +4 一名26考研生 2026-04-04 4/200 2026-04-05 10:01 by barlinike
[考研] 材料调剂 +9 革微桂 2026-04-04 9/450 2026-04-05 08:27 by 544594351
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学085600英一数二337分求调剂 +11 lyz0427 2026-04-03 11/550 2026-04-04 15:31 by dongzh2009
[考研] 22408求调剂 354分 可跨专业 +3 hannnnnnn 2026-04-04 3/150 2026-04-04 14:35 by 土木硕士招生
[考研] 278求调剂 +6 Yy7400 2026-04-03 6/300 2026-04-04 09:53 by zhangdingwa
[考研] 求调剂 +3 心想事成可 2026-04-03 3/150 2026-04-03 11:22 by wangjy2002
[考研] 调剂 +3 osbbx 2026-04-02 3/150 2026-04-03 07:47 by cc8418
[考研] 一志愿大工学硕,求调剂 +4 yub0811 2026-04-02 4/200 2026-04-02 21:36 by 百灵童888
[考研] 261求B区调剂 +5 明仔· 2026-04-01 7/350 2026-04-02 11:17 by 邹尉尉
[考研] 一志愿北交材料工程总分358 +5 cs0106 2026-04-01 7/350 2026-04-01 11:45 by wangjy2002
[考研] 一志愿西交大080500材料学硕349 +6 jqx1258 2026-03-31 7/350 2026-03-31 21:08 by yuq
[考研] 一志愿浙江大学工科动力工程370,数一121,专业课135,现在能去哪里 +3 080700调剂 2026-03-30 4/200 2026-03-31 12:00 by KLMY666
信息提示
请填处理意见