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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » miRNA qPCR内参基因的选择
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478156976

木虫 (小有名气)

[交流] miRNA qPCR内参基因的选择 已有12人参与

我要做植物的miRNA的实时定量，之前实验室用的actin作为内参，不过最近看到大家好像都用的U6什么的，actin不行么？

[ Last edited by silicare on 2014-2-19 at 17:09 ]
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1楼 2013-07-07 10:37:35
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wxptr

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
actin与miRNA大小差异较大，不适用于miRNA的实时定量时的内参
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6楼2014-02-19 16:29:40
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普通回帖

wxl007777

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物版块 期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-07 12:27:25
我们做mRNA的一般用actin，miRNA的就不知道了
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2楼2013-07-07 12:24:04
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fankaitea

金虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-20 21:49:11
5.8S RNA也可以
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3楼2013-07-07 15:43:01
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478156976

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wxl007777 at 2013-07-07 12:24:04
我们做mRNA的一般用actin，miRNA的就不知道了

嗯，我们做mRNA也是actin
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4楼2013-07-08 08:41:42
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forward19

金虫 (小有名气)
★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-21 07:58:22
miRNA用5.8S
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5楼2013-07-20 17:23:29
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forrestgump

新虫 (著名写手)
★
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这个我是专家，U6或者5S RNA都可以的！
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7楼2014-02-19 19:24:48
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mygoalcas

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
7楼: Originally posted by forrestgump at 2014-02-19 19:24:48
这个我是专家，U6或者5S RNA都可以的！

请问做逆转录获取cDNA模板时，目的miRNA和内参U6的stemloop引物是加到同一个管子里进行逆转录，得到一管cDNA，还是目的miRNA和内参U6的stemloop引物加到两个不同的管子里进行逆转录，得到两管cDNA呢？我现在是分别加到两个管子里做逆转录，但一个师兄说内参要和目的基因用同一管cDNA模板。

我感觉我很难表述清楚我的问题，我换个说法，就是逆转录反应获得的cDNA模板是同一管，即同时含有目的miRNA和内参U6的cDNA，还是在两个管子里分别逆转录目的miRNA和内参U6，得到两管不同的cDNA呢？

非常谢谢师兄/师姐的解答！
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8楼2014-02-20 04:53:26
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杨玉婷monica

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by forrestgump at 2014-02-19 19:24:48
这个我是专家，U6或者5S RNA都可以的！

这个内参问题我也是很疑惑的 因为感觉似乎要用已经在本物种里证实过比较稳定的基因序列 并且已经发表的内参基因吧？  还是不考虑物种差异  通用5S U6之类的？
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9楼2014-06-23 11:05:15
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qjf117

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by forrestgump at 2014-02-19 19:24:48
这个我是专家，U6或者5S RNA都可以的！

若U6或者5S RNA，在不同组织差异较大，其他还有选择吗？多谢。
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10楼2014-07-08 08:55:10
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