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找自己123

铁虫 (小有名气)

[求助] qPCR 内参 差异大 已有2人参与

qPCR 我的内参做出来 Ct值差很多,生物学重复内参都有差很多的 ,肿么个情况这是。
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OmicsLink

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-05-14 08:35:30
一般Ct值在15~35之间比较理想,Ct值过小,说明模板浓度过高,需要稀释;Ct值过大,说明模板浓度过低,需要浓缩。通常的内参基因是表达量较高的持家基因,如果Ct值差过大,用内参基因来衡量目标基因的表达量(绝对值)就不完全可靠,至少可以说明目标基因表达非常低,甚至该样品不适合做相对定量,而是需要绝对定量。希望能帮到你。
一切有为法,如露如闪电
2楼2014-05-13 17:26:20
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找自己123

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by OmicsLink at 2014-05-13 17:26:20
一般Ct值在15~35之间比较理想,Ct值过小,说明模板浓度过高,需要稀释;Ct值过大,说明模板浓度过低,需要浓缩。通常的内参基因是表达量较高的持家基因,如果Ct值差过大,用内参基因来衡量目标基因的表达量(绝对值 ...

我不同组之间 跑出来的 内参Ct 有些差很多,这是内参不稳定造成的还是什么原因
3楼2014-05-13 22:54:38
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OmicsLink

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 找自己123 at 2014-05-13 22:54:38
我不同组之间 跑出来的 内参Ct 有些差很多,这是内参不稳定造成的还是什么原因...

RNA的量不稳定了也有可能。
一切有为法,如露如闪电
4楼2014-05-14 10:48:57
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
换个内参试试,qPCR可以参照MIQE标准来做,文章更容易发出来

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-05-14 10:55:58
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