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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » qPCR 内参 差异大
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找自己123

铁虫 (小有名气)

[求助] qPCR 内参 差异大 已有2人参与

qPCR 我的内参做出来 Ct值差很多，生物学重复内参都有差很多的 ，肿么个情况这是。
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1楼 2014-05-13 16:37:47
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找自己123

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by OmicsLink at 2014-05-13 17:26:20
一般Ct值在15~35之间比较理想，Ct值过小，说明模板浓度过高，需要稀释；Ct值过大，说明模板浓度过低，需要浓缩。通常的内参基因是表达量较高的持家基因，如果Ct值差过大，用内参基因来衡量目标基因的表达量（绝对值 ...

我不同组之间 跑出来的 内参Ct 有些差很多，这是内参不稳定造成的还是什么原因
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3楼2014-05-13 22:54:38
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OmicsLink

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-05-14 08:35:30
一般Ct值在15~35之间比较理想，Ct值过小，说明模板浓度过高，需要稀释；Ct值过大，说明模板浓度过低，需要浓缩。通常的内参基因是表达量较高的持家基因，如果Ct值差过大，用内参基因来衡量目标基因的表达量（绝对值）就不完全可靠，至少可以说明目标基因表达非常低，甚至该样品不适合做相对定量，而是需要绝对定量。希望能帮到你。
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一切有为法，如露如闪电
2楼2014-05-13 17:26:20
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OmicsLink

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 找自己123 at 2014-05-13 22:54:38
我不同组之间 跑出来的 内参Ct 有些差很多，这是内参不稳定造成的还是什么原因...

RNA的量不稳定了也有可能。
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一切有为法，如露如闪电
4楼2014-05-14 10:48:57
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换个内参试试，qPCR可以参照MIQE标准来做，文章更容易发出来

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2014-05-14 10:55:58
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