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cnb1987

银虫 (小有名气)

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[求助] 做荧光定量时看家基因的CT值？

大家好，最近在做荧光定量，做了几次之后，发现看家基因的CT值都在30左右，是不是我的模版量加的太少还是cDNA有问题？，一般三个重复三个，有的品均值值还在33左右，大家能给我点意见么？

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1楼 2013-03-08 11:12:10

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hy_sandra

铜虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

一般?碚f，用2ugRNA轉成cDNA(體積為20ul)，拿1ul作real time PCR，其actin約為18~22ct,而GAPDH則多一點會到25ct左右。看了一下，programe應沒太大問題, 只是annealing溫度若是高於50度，我的時間不會設這麼短，至少也20秒。也許你可以先用一般pcr後再跑gel看看，可以確定programe及產物沒問題。還有，我的經驗是，若當初提取RNA後,回溶的體積太大，以致於定量的的OD小於0.3，以至於之後的ct會變多很多

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