应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求帮忙！！目的基因Ct值很高
91/1返回列表
查看: 4102  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

rriangle

新虫 (初入文坛)

[求助] 求帮忙！！目的基因Ct值很高 已有2人参与

本人是新手，最近在做荧光定量PCR，用的是THERMO公司的仪器，cDNA稀释10倍后，内参GADPH ct值都在25左右，但是几个目的基因都在30多，要不然就是非数字，然后我又把cDNA稀释5倍，GADPH ct值在15左右，目的基因还是在30多，要不然就是非数字，好不容易有个目的基因跑出来了，结果实验组的相对量比对照组还低，我想知道是引物不好么？我的引物是生工的，还有内参跑出来了是不是说明我的cDNA没有问题？因为我是组织，以前也没做过，我怕被我污染了，多谢各位大神赐教啊。。。！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-19 12:53:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yzj926521

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
目的基因表达量太低了，试一下2倍稀释或者用25ul体系扩增，多换条件试试吧
我最近做的一个基因也是表达量很低,ct都大于30了，正在调整中
赞一下 回复此楼
2楼2014-09-19 16:54:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bullfrog325

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-19 23:49:23
"cDNA稀释10倍后，内参GADPH ct值都在25左右" vs. "又把cDNA稀释5倍，GADPH ct值在15左右"

楼主你到PCR很有问题， 不可能两倍的模版浓度会产生这么大的Ct差距
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-19 19:38:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rriangle

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by bullfrog325 at 2014-09-19 19:38:25
"cDNA稀释10倍后，内参GADPH ct值都在25左右" vs. "又把cDNA稀释5倍，GADPH ct值在15左右"

楼主你到PCR很有问题， 不可能两倍的模版浓度会产生这么大的Ct差距

那到底是哪里出现问题了呢`
赞一下 回复此楼
4楼2014-09-28 22:37:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

by小宁

木虫 (初入文坛)
亲  你后来怎么解决的啊？
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2015-07-08 14:25:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

南宫紫玉

新虫 (正式写手)
我也遇到了类似的情况，不过我的cDNA质量应该没有问题，跑出来的内参Ｃｔ值在２５左右，感觉不是很好，一直想调低一点呢！做了几个月了，试了好多方法，还正在摸索中．．．．．
赞一下 回复此楼
6楼2015-07-28 23:50:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

南宫紫玉

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by by小宁 at 2015-07-08 14:25:00
亲  你后来怎么解决的啊？

我也遇到了类似的情况，不过我的cDNA质量应该没有问题，跑出来的内参Ｃｔ值在２５左右，感觉不是很好，一直想调低一点呢！做了几个月了，试了好多方法，还正在摸索中．．．．．你的问题解决了没呢？
赞一下 回复此楼
7楼2015-07-28 23:52:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

adaju

铁虫 (初入文坛)
亲，你解决了吗
回复此楼
明天和意外，你永远不知道哪一个先到。
8楼2016-03-11 12:31:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷素雪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yzj926521 at 2014-09-19 16:54:24
目的基因表达量太低了，试一下2倍稀释或者用25ul体系扩增，多换条件试试吧
我最近做的一个基因也是表达量很低,ct都大于30了，正在调整中

你好，如果目的基因的表达量太低的话，不可以cDNA稀释的时候，目的基因用一个稀释度，内参基因用一个稀释度吗？
赞一下 回复此楼
9楼2018-12-13 16:37:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 rriangle 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 欢迎采矿、地质、岩土、计算机、人工智能等专业的同学报考 +3 pin8023 2026-02-28 5/250 2026-03-02 00:24 by 花YOU重开日
[考研] 284求调剂 +8 天下熯 2026-02-28 8/400 2026-03-02 00:15 by 暮雨星晴
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分，求调剂 +5 wsl111 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:45 by 暮雨星晴
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:31 by L135790
[考研] 0856材料与化工，270求调剂 +6 YXCT 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:21 by 向上的胖东
[考研] 0856求调剂285 +10 吕仔龙 2026-02-28 10/500 2026-03-01 21:37 by 公瑾逍遥
[考研] 299求调剂 +3 Y墨明棋妙Y 2026-02-28 5/250 2026-03-01 21:01 by tangxiaotian
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考研] 材料284求调剂，一志愿郑州大学英一数二专硕 +10 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 10/500 2026-03-01 14:12 by yc258
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭