应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量扩增效率问题
71/1返回列表
查看: 4502  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

thinkerboy

铁虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量扩增效率问题

最近在做相对荧光定量的标准曲线，机器是ABI stepone但是其中有个基因的扩增效率达到121了并且有一个点的两个重复之间ct值超过了0.2.
请高手帮我看看扩增效率怎么这么高，我如果提高退火温度扩增效率会不会小点。
荧光定量扩增效率问题
捕获1.PNG


荧光定量扩增效率问题-1
捕获2.PNG


荧光定量扩增效率问题-2
捕获3.PNG
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-06-13 11:14:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)
★
myprayer: 金币+1, Send one rose fragrance in hand, thank you loosen one's purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-06-13 13:41:14
我感觉两个方面，阈值太高，还有就是似乎梯度稀释的不是太好
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-06-13 11:54:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

thinkerboy

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2013-06-13 11:54:04
我感觉两个方面，阈值太高，还有就是似乎梯度稀释的不是太好

阈值是系统自己设定的，梯度稀释我只稀释了4个梯度。
赞一下 回复此楼
3楼2013-06-13 14:37:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by thinkerboy at 2013-06-13 14:37:31
阈值是系统自己设定的，梯度稀释我只稀释了4个梯度。...

能否手动设定，你梯度如果是10倍稀释的话，感觉不是很好
赞一下 回复此楼
4楼2013-06-13 14:52:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-13 19:23:21
thinkerboy: 金币+2 2013-06-17 15:09:42
你这个单从扩增效率来看是稍微不太理想 slope 是-2.8 左右 不是很好 另外你这个溶解曲线重合的也不是很好 表明引物设计的特异性不是很高
赞一下 回复此楼
5楼2013-06-13 16:41:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

独孤蚕

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

我感觉主要还是浓度梯度没有做好。稀释不好，对扩增效率的计算影响很大的。
赞一下 回复此楼
6楼2013-07-04 08:30:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taccycle

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2013-06-13 11:54:04
我感觉两个方面，阈值太高，还有就是似乎梯度稀释的不是太好

阈值有可能设置的不好，你可以看一下那个半对数的图，然后手动调节阈值线到指数扩增区域，梯度稀释的话问题可能不大，但是有一点，你最好多设置几个浓度梯度，4个太少了，至少要有5个，你的熔解曲线问题倒是不大，重合的也还可以
赞一下 回复此楼
用心
7楼2013-10-17 12:37:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 thinkerboy 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考博] 欢迎申博同学联系 +3 天道酬勤2026686 2026-03-10 7/350 2026-03-15 19:03 by 天道酬勤2026686
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[考研] 云南财经大学信息学院计算机学硕专硕学位点 +3 zjptai 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:23 by 飞行琦
[考研] 求调剂 +6 yfihxh 2026-03-09 6/300 2026-03-14 01:18 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +8 zchqwer 2026-03-10 8/400 2026-03-14 00:01 by JourneyLucky
[考研] 材料工程,326分，求调剂 +6 KRSLSR 2026-03-10 6/300 2026-03-13 23:47 by JourneyLucky
[考研] 复试调剂 +9 Copy267 2026-03-10 9/450 2026-03-13 23:45 by userper
[考研] 一志愿中科院，化学方向，295求调剂 +4 一氧二氮 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:35 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[考研] 材料301分求调剂 +5 Liyouyumairs 2026-03-12 5/250 2026-03-13 14:42 by JourneyLucky
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 282分材料专业求调剂院校 +18 枫桥ZL 2026-03-09 25/1250 2026-03-13 10:47 by 白夜悠长
[考研] 296求调剂 +3 大口吃饭 身体健 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:31 by 学员8dgXkO
[考研] 08食品或轻工求调剂，本科发表3篇sci一区top论文，一志愿南师大食品科学与工程 +3 我是一个兵， 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:21 by Yuyi.
[考研] 哈工大材料324求调剂 +6 闫旭东 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:49 by 星空星月
[考研] 调剂 +5 呵唔哦豁 2026-03-10 5/250 2026-03-10 22:00 by 28375m
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭