24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 4556  |  回复: 6

thinkerboy

铁虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量扩增效率问题

最近在做相对荧光定量的标准曲线,机器是ABI stepone但是其中有个基因的扩增效率达到121了并且有一个点的两个重复之间ct值超过了0.2.
请高手帮我看看扩增效率怎么这么高,我如果提高退火温度扩增效率会不会小点。
荧光定量扩增效率问题
捕获1.PNG


荧光定量扩增效率问题-1
捕获2.PNG


荧光定量扩增效率问题-2
捕获3.PNG
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)



myprayer: 金币+1, Send one rose fragrance in hand, thank you loosen one's purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-06-13 13:41:14
我感觉两个方面,阈值太高,还有就是似乎梯度稀释的不是太好
2楼2013-06-13 11:54:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

thinkerboy

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2013-06-13 11:54:04
我感觉两个方面,阈值太高,还有就是似乎梯度稀释的不是太好

阈值是系统自己设定的,梯度稀释我只稀释了4个梯度。
3楼2013-06-13 14:37:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)


引用回帖:
3楼: Originally posted by thinkerboy at 2013-06-13 14:37:31
阈值是系统自己设定的,梯度稀释我只稀释了4个梯度。...

能否手动设定,你梯度如果是10倍稀释的话,感觉不是很好
4楼2013-06-13 14:52:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-13 19:23:21
thinkerboy: 金币+2 2013-06-17 15:09:42
你这个单从扩增效率来看是稍微不太理想 slope 是-2.8 左右 不是很好 另外你这个溶解曲线重合的也不是很好 表明引物设计的特异性不是很高
5楼2013-06-13 16:41:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

独孤蚕

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

我感觉主要还是浓度梯度没有做好。稀释不好,对扩增效率的计算影响很大的。
6楼2013-07-04 08:30:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taccycle

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2013-06-13 11:54:04
我感觉两个方面,阈值太高,还有就是似乎梯度稀释的不是太好

阈值有可能设置的不好,你可以看一下那个半对数的图,然后手动调节阈值线到指数扩增区域,梯度稀释的话问题可能不大,但是有一点,你最好多设置几个浓度梯度,4个太少了,至少要有5个,你的熔解曲线问题倒是不大,重合的也还可以
用心
7楼2013-10-17 12:37:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 thinkerboy 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中科大材料与化工,353分还有调剂学校吗 +11 否极泰来2026 2026-04-15 13/650 2026-04-20 22:31 by Equinoxhua
[教师之家] 又一批高校组建人工智能学院 师资行吗 不是骗人吗 +4 yexuqing 2026-04-19 4/200 2026-04-20 14:47 by brantleo
[考研] 337求调剂 +3 jyz04 2026-04-18 3/150 2026-04-20 12:24 by 研可安
[考博] 申博 +3 Xyyx. 2026-04-18 3/150 2026-04-20 10:44 by YuY66
[考博] 湖南大学刘巧玲课题组2026年第二批次博士研究生招生信息 +3 南风观火 2026-04-18 5/250 2026-04-20 10:13 by 南风观火
[考研] 求计算机方向调剂 +3 Toffee2 2026-04-16 6/300 2026-04-19 22:37 by ll叶
[考研] 通信工程求调剂!!! +7 zlb770521 2026-04-14 7/350 2026-04-19 20:56 by Equinoxhua
[考研] 294求调剂 +8 淡然654321 2026-04-17 9/450 2026-04-19 19:51 by Equinoxhua
[考研] 求调剂推荐 +9 小聂爱学习 2026-04-14 9/450 2026-04-19 17:03 by 中豫男
[考研] 求调剂 +10 小聂爱学习 2026-04-16 12/600 2026-04-19 16:51 by 中豫男
[考研] 291求调剂 +12 关忆北. 2026-04-14 13/650 2026-04-19 16:50 by 中豫男
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +10 lzmk 2026-04-14 11/550 2026-04-19 16:42 by 中豫男
[考研] 求调剂 +6 苦命人。。。 2026-04-18 7/350 2026-04-19 16:27 by 中豫男
[考研] 307中医考研调剂 +9 于以采蘩 2026-04-14 9/450 2026-04-19 08:41 by 烟雨流涯
[考研] 0854求调剂 +23 门路摸摸 2026-04-15 27/1350 2026-04-19 01:59 by 烟雨流涯
[考研] 急需调剂 +9 绝不放弃22 2026-04-15 10/500 2026-04-18 08:09 by chixmc
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 295分求调剂 +5 ?要上岸? 2026-04-17 5/250 2026-04-17 16:51 by fenglj492
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
[考研] 一志愿沪9,生物学326求调剂 +9 刘墨墨 2026-04-15 9/450 2026-04-16 17:14 by 崔崔崔cccc
信息提示
请填处理意见