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wushuwei1104

银虫 (小有名气)


[交流] 我的实时定量溶解曲线图,有问题想请教各位!

这是我做的实时定量溶解曲线图,图中在目的基因扩增峰前面有个小小的凸起,请问这会影响实验结果吗?这样的图,发英文文章的话可以不可以?还有就是前面的小凸起是什么原因造成的?请各位大侠指点,谢谢!!




第二张扩增曲线中前面有个凹陷,这个是什么造成的?会不会影响实验结果?能不能发英文文章。谢谢!!!

溶解曲线,后面大峰为目的基因峰,前面小凸起。



溶解曲线,后面大峰为目的基因峰,前面小凹陷。
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tupac225

金虫 (正式写手)


★ ★
wushuwei1104(金币+1): 谢谢参与
1949stone: 金币+1, 有时候就是不会很完美啊啊 2012-07-17 07:28:31
发英文的肯定不行了,图不是太完美.
3楼2012-07-16 12:41:18
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wmjqy

新虫 (初入文坛)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1949stone: 金币+2, 鼓励 2012-07-17 07:28:04
你这个可能引物设计有问题。碱基对过长,从这个图可以看出你的Tm值都快92了!!!!!引物严重过长,你这个引物用来跑普通PCR的吧~!???.实时荧光定量的引物和普通的引物是有区别的。建议找英韦创津或TAKARA设计或合成引物。
5楼2012-07-16 23:28:01
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普通回帖

霹雳光

至尊木虫 (著名写手)



wushuwei1104(金币+1): 谢谢参与
不行吧,太简单了吧
2楼2012-07-16 11:51:52
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shenye.judy

木虫 (正式写手)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-16 13:56:09
溶解曲线是不大好看,建议做完qPCR后,可以跑个胶,或者加点染料再跑,看看有没有其他条带的影响。

如果结果还是不好,就建议重新设计引物。

但是,如果你溶解曲线都要提供的话,你应该还要确定你的扩增效率才行啊,这个对qPCR也是很重要的,你可以考虑下。
4楼2012-07-16 13:25:08
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)


引用回帖:
5楼: Originally posted by wmjqy at 2012-07-16 23:28:01
你这个可能引物设计有问题。碱基对过长,从这个图可以看出你的Tm值都快92了!!!!!引物严重过长,你这个引物用来跑普通PCR的吧~!???.实时荧光定量的引物和普通的引物是有区别的。建议找英韦创津或TAKARA设计或合 ...

谢谢!
6楼2012-07-17 09:45:24
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)


引用回帖:
4楼: Originally posted by shenye.judy at 2012-07-16 13:25:08
溶解曲线是不大好看,建议做完qPCR后,可以跑个胶,或者加点染料再跑,看看有没有其他条带的影响。

如果结果还是不好,就建议重新设计引物。

但是,如果你溶解曲线都要提供的话,你应该还要确定你的扩增效率才 ...

谢谢您!
7楼2012-07-17 09:45:32
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by 霹雳光 at 2012-07-16 11:51:52
不行吧,太简单了吧

谢谢!
8楼2012-07-17 09:45:39
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)


引用回帖:
3楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-16 12:41:18
发英文的肯定不行了,图不是太完美.

谢谢!!
9楼2012-07-17 09:45:46
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xw19880905

新虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引物设计不行,一般来说qPCR的引物长度在150bp左右,前面那个峰应该是二聚体,也就是说你设计的引物不特异
10楼2012-07-17 11:01:34
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)


引用回帖:
10楼: Originally posted by xw19880905 at 2012-07-17 11:01:34
引物设计不行,一般来说qPCR的引物长度在150bp左右,前面那个峰应该是二聚体,也就是说你设计的引物不特异

看来发英文的愿望 破灭了------!  谢谢
11楼2012-07-17 12:10:53
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Rick001

铁杆木虫 (职业作家)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
尽量优化,感觉优化的差不多了,然后看实验的重现性吧。
根据自己看文献的情况,文章中貌似很少出现这种图,不过也得考虑审稿人让提供的情况。
12楼2012-07-17 20:50:03
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flyaway7585

金虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
两个都是引物二聚体,其实两个图是一样的。发英文文章没有用溶解曲线的吧!
13楼2012-07-17 22:58:52
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flyaway7585

金虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by wmjqy at 2012-07-16 23:28:01
你这个可能引物设计有问题。碱基对过长,从这个图可以看出你的Tm值都快92了!!!!!引物严重过长,你这个引物用来跑普通PCR的吧~!???.实时荧光定量的引物和普通的引物是有区别的。建议找英韦创津或TAKARA设计或合 ...

上海生工的引物比TAKARA便宜很多,而且质量也相当不错的。
14楼2012-07-17 23:00:50
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nmhsd

木虫 (正式写手)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-18 13:52:53
也还行,关键看你的文章是干什么,如果说是专门建立荧光定量检测方法的文章那就不行,如果你的文章重点在别处,这样的溶解曲线还行。
15楼2012-07-17 23:54:51
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ximenzoe

新虫 (初入文坛)


跑的差劲
16楼2012-07-18 08:45:36
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xw19880905

新虫 (小有名气)


最好重新设计引物
17楼2012-07-18 11:44:19
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