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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

[交流] 我的实时定量溶解曲线图，有问题想请教各位！

这是我做的实时定量溶解曲线图，图中在目的基因扩增峰前面有个小小的凸起，请问这会影响实验结果吗？这样的图，发英文文章的话可以不可以？还有就是前面的小凸起是什么原因造成的？请各位大侠指点，谢谢！！




第二张扩增曲线中前面有个凹陷，这个是什么造成的？会不会影响实验结果？能不能发英文文章。谢谢！！！

溶解曲线，后面大峰为目的基因峰，前面小凸起。



溶解曲线，后面大峰为目的基因峰，前面小凹陷。
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1楼 2012-07-16 11:42:48
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回帖置顶 ( 共有1个 )

tupac225

金虫 (正式写手)
★ ★
wushuwei1104(金币+1): 谢谢参与
1949stone: 金币+1, 有时候就是不会很完美啊啊 2012-07-17 07:28:31
发英文的肯定不行了,图不是太完美.
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3楼2012-07-16 12:41:18
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wmjqy

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1949stone: 金币+2, 鼓励 2012-07-17 07:28:04
你这个可能引物设计有问题。碱基对过长，从这个图可以看出你的Tm值都快92了！！！！！引物严重过长，你这个引物用来跑普通PCR的吧~！???.实时荧光定量的引物和普通的引物是有区别的。建议找英韦创津或TAKARA设计或合成引物。
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5楼2012-07-16 23:28:01
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普通回帖

霹雳光

至尊木虫 (著名写手)
★
wushuwei1104(金币+1): 谢谢参与
不行吧，太简单了吧
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2楼2012-07-16 11:51:52
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shenye.judy

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-16 13:56:09
溶解曲线是不大好看，建议做完qPCR后，可以跑个胶，或者加点染料再跑，看看有没有其他条带的影响。

如果结果还是不好，就建议重新设计引物。

但是，如果你溶解曲线都要提供的话，你应该还要确定你的扩增效率才行啊，这个对qPCR也是很重要的，你可以考虑下。
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4楼2012-07-16 13:25:08
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wmjqy at 2012-07-16 23:28:01
你这个可能引物设计有问题。碱基对过长，从这个图可以看出你的Tm值都快92了！！！！！引物严重过长，你这个引物用来跑普通PCR的吧~！???.实时荧光定量的引物和普通的引物是有区别的。建议找英韦创津或TAKARA设计或合 ...

谢谢！
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6楼2012-07-17 09:45:24
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shenye.judy at 2012-07-16 13:25:08
溶解曲线是不大好看，建议做完qPCR后，可以跑个胶，或者加点染料再跑，看看有没有其他条带的影响。

如果结果还是不好，就建议重新设计引物。

但是，如果你溶解曲线都要提供的话，你应该还要确定你的扩增效率才 ...

谢谢您！
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7楼2012-07-17 09:45:32
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 霹雳光 at 2012-07-16 11:51:52
不行吧，太简单了吧

谢谢！
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8楼2012-07-17 09:45:39
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-16 12:41:18
发英文的肯定不行了,图不是太完美.

谢谢！！
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9楼2012-07-17 09:45:46
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xw19880905

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引物设计不行，一般来说qPCR的引物长度在150bp左右，前面那个峰应该是二聚体，也就是说你设计的引物不特异
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10楼2012-07-17 11:01:34
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by xw19880905 at 2012-07-17 11:01:34
引物设计不行，一般来说qPCR的引物长度在150bp左右，前面那个峰应该是二聚体，也就是说你设计的引物不特异

看来发英文的愿望 破灭了------！  谢谢
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11楼2012-07-17 12:10:53
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Rick001

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
尽量优化，感觉优化的差不多了，然后看实验的重现性吧。
根据自己看文献的情况，文章中貌似很少出现这种图，不过也得考虑审稿人让提供的情况。
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12楼2012-07-17 20:50:03
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flyaway7585

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
两个都是引物二聚体，其实两个图是一样的。发英文文章没有用溶解曲线的吧！
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13楼2012-07-17 22:58:52
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flyaway7585

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by wmjqy at 2012-07-16 23:28:01
你这个可能引物设计有问题。碱基对过长，从这个图可以看出你的Tm值都快92了！！！！！引物严重过长，你这个引物用来跑普通PCR的吧~！???.实时荧光定量的引物和普通的引物是有区别的。建议找英韦创津或TAKARA设计或合 ...

上海生工的引物比TAKARA便宜很多，而且质量也相当不错的。
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14楼2012-07-17 23:00:50
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nmhsd

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-18 13:52:53
也还行，关键看你的文章是干什么，如果说是专门建立荧光定量检测方法的文章那就不行，如果你的文章重点在别处，这样的溶解曲线还行。
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15楼2012-07-17 23:54:51
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ximenzoe

新虫 (初入文坛)
跑的差劲
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16楼2012-07-18 08:45:36
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xw19880905

新虫 (小有名气)
最好重新设计引物
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17楼2012-07-18 11:44:19
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